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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 菌液PCR与普通PCR有啥区别!

请问各位虫友菌液PCR与普通PCR在操作时有什么区别吗?!有啥需要特别注意的吗?
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孔乙己

银虫 (正式写手)


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没什么区别,就是模板不同,普通PCR以纯化后的DNA为模板,菌落PCR也菌为模板,PCR是菌液PCR的变性时间应略长于普通PCR。呵呵,你是不是在做阳性克隆鉴定啊?
愿大家共同进步
2楼2009-06-25 08:58:50
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由,人权之基。

优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一个是加煮沸的菌液 一个是加纯DNA模板
菌液PCR不是很可靠, 一般筛选的时候用
并且可能有非特异性扩增(假阳性),而且有个时候明明有 就是P不出来
所以  一般我筛选也尽量不用菌液PCR
菌液PCR最大的优点当然是省时省事咯
注意菌液PCR作模版的时候 加量币普通PCR要多点 因为模版浓度太低
一般3-5微升(50微升体系)
从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
3楼2009-06-25 09:00:44
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wzhzhc

银虫 (初入文坛)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
在第一步变性的时候时间稍长,例如4 min 左右。
接下来的循环 按正常的设置就可以了。
4楼2009-06-25 09:02:05
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savetheday

银虫 (小有名气)

没有区别,
Godbless
5楼2009-06-25 10:30:01
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

Thank you very much to 以上各位,小弟明白啦!
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6楼2009-06-25 10:52:02
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liouwzh

木虫 (正式写手)

菌液PCR跟不同的菌也有关系,有的菌如大肠就比较好做,有的就比较难,要提基因组再PCR
7楼2009-06-26 14:03:07
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yanlili

金虫 (正式写手)


菌液PCR通常要的酶要多一点,因为相比DNA来说,杂质更多一些,先变性10min
8楼2009-06-26 14:20:35
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smallcat227

木虫 (著名写手)


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如果是阳性菌的话,菌液PCR之前最好先煮沸5-10min,阴性菌直接把菌悬液当模板加就可以了,可以适当延长预变性时间
菌液PCR杂质会较多,产物检测时可能会有RNA和蛋白,如果要回收产物的话最好低电压跑长胶……
9楼2009-06-27 08:58:49
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