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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 这样的PCR产物可以测序吗
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sm2008

金虫 (小有名气)

[交流] 这样的PCR产物可以测序吗

请大家帮我看看这样的PCR产物可以测序吗？我送上海生工，工作人员告诉说纯化后还测不出来，我已经用不同的退火温度（49-65度），总是这个样子。

[ Last edited by 350784478 on 2009-6-24 at 22:15 ]
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1楼 2009-06-24 22:12:08
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herot

金虫 (小有名气)
★
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从条带亮度看，切胶纯化再测问题应该不大，但是也不排除pcr引物测序不太合适的问题。
连接到载体里再测是最保险的，就是费事点。
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树欲静而风不止
7楼2009-06-25 10:39:43
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普通回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
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连接 T载体再去测序吧.呵呵,有些许的拖尾
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-06-24 22:13:30
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sm2008

金虫 (小有名气)
谢谢二楼，我有18个不同的样品要测呀，做连接工作量有点大。
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3楼2009-06-24 22:14:53
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anik

银虫 (正式写手)
★
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PCR 产物直接测序是比较难的，最好就是连接进载体，上下游序列都是已知的，非常容易测序
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4楼2009-06-25 08:21:18
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xiaochong0101

铜虫 (小有名气)
★
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18个不算多啊，我做的比你多多了，都是连接后测序，这样保险啊。
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5楼2009-06-25 08:32:55
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★
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没啥不可以的，直接送去就可以，大致测下浓度，还要附送引物及引物浓度。invitrogen就能测。PCR产物最好纯化一下。
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金币是赌出来的
6楼2009-06-25 09:03:14
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forget1997

银虫 (小有名气)
★
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这样的亮度，纯化 （割胶 或者 直接用回收试剂盒）测序绝对是没有问题的。
侧不出来，有可能是引物不太好。试着设计内引物来测序。
连接、克隆测序完全没有必要。工作量要大很多倍，尽管效果可能更好 （克隆测序普遍背景更干净）。
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8楼2009-06-25 13:17:43
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
胶回收，连t载体，再测序
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9楼2009-06-25 14:11:42
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sm2008

金虫 (小有名气)
谢谢楼上的各位，我在生工测，他说测不出，各位能否推荐个好一点的测序公司呀？
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10楼2009-06-25 14:23:00
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