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sm2008

金虫 (小有名气)

[交流] 这样的PCR产物可以测序吗

请大家帮我看看这样的PCR产物可以测序吗?我送上海生工,工作人员告诉说纯化后还测不出来,我已经用不同的退火温度(49-65度),总是这个样子。

[ Last edited by 350784478 on 2009-6-24 at 22:15 ]
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herot

金虫 (小有名气)


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从条带亮度看,切胶纯化再测问题应该不大,但是也不排除pcr引物测序不太合适的问题。
连接到载体里再测是最保险的,就是费事点。
树欲静而风不止
7楼2009-06-25 10:39:43
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普通回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
连接 T载体再去测序吧.呵呵,有些许的拖尾
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-06-24 22:13:30
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sm2008

金虫 (小有名气)

谢谢二楼,我有18个不同的样品要测呀,做连接工作量有点大。
3楼2009-06-24 22:14:53
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anik

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
PCR 产物直接测序是比较难的,最好就是连接进载体,上下游序列都是已知的,非常容易测序
4楼2009-06-25 08:21:18
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xiaochong0101

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
18个不算多啊,我做的比你多多了,都是连接后测序,这样保险啊。
5楼2009-06-25 08:32:55
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户


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没啥不可以的,直接送去就可以,大致测下浓度,还要附送引物及引物浓度。invitrogen就能测。PCR产物最好纯化一下。
金币是赌出来的
6楼2009-06-25 09:03:14
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forget1997

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这样的亮度,纯化 (割胶 或者 直接用回收试剂盒)测序绝对是没有问题的。
侧不出来,有可能是引物不太好。试着设计内引物来测序。
连接、克隆测序完全没有必要。工作量要大很多倍,尽管效果可能更好 (克隆测序普遍背景更干净)。
8楼2009-06-25 13:17:43
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)


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胶回收,连t载体,再测序
9楼2009-06-25 14:11:42
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sm2008

金虫 (小有名气)

谢谢楼上的各位,我在生工测,他说测不出,各位能否推荐个好一点的测序公司呀?
10楼2009-06-25 14:23:00
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