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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 这样的PCR产物可以测序吗
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sm2008

金虫 (小有名气)

[交流] 这样的PCR产物可以测序吗

请大家帮我看看这样的PCR产物可以测序吗？我送上海生工，工作人员告诉说纯化后还测不出来，我已经用不同的退火温度（49-65度），总是这个样子。

[ Last edited by 350784478 on 2009-6-24 at 22:15 ]
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1楼 2009-06-24 22:12:08
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wjg_1979

木虫 (小有名气)
★
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赞同forget1997 的说法，测序用的引物比PCR扩增的引物要求要高些,能P出来的,可能测序就会有问题. 不过最好是用T载体连接后再测序,这样你获得的序列比较完整,直接测序的话,上下游最少有50-100nt是不可信的．其实这样好的条带是很好连接的，一次就可分别连上，同时获得的质粒也好保存．
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13楼2009-06-25 17:06:49
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
连接 T载体再去测序吧.呵呵,有些许的拖尾
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-06-24 22:13:30
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sm2008

金虫 (小有名气)
谢谢二楼，我有18个不同的样品要测呀，做连接工作量有点大。
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3楼2009-06-24 22:14:53
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anik

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PCR 产物直接测序是比较难的，最好就是连接进载体，上下游序列都是已知的，非常容易测序
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4楼2009-06-25 08:21:18
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