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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 菌液PCR后，出现非特异条带，是怎么回事？
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xiaofan66

[交流] 菌液PCR后，出现非特异条带，是怎么回事？

蓝白斑筛选后，挑白斑进行菌液PCR后（PCR时，10uL体系，取1uL菌液作为模板），出现非特异条带（如图），我使用的是目的片段的引物，目的片段大约500bp，可是在2000bp以上，出现了明亮的条带，是哪步出现了问题？

由于是隔天照的照片，MARKER效果不好，条带在2000bp以上。

[ Last edited by 350784478 on 2009-6-22 at 16:09 ]
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1楼 2009-06-22 15:57:40
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350784478

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
xiaofan66(金币+1,VIP+0):能在具体些么，是哪一步操作剧烈了 6-22 16:14
xiaofan66(金币+1,VIP+0): 6-22 16:14
有可能是你太激烈吹打，导致你的目的基因条带某处断裂，随后经PCR，产生这样的结果。
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
2楼2009-06-22 16:12:16
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350784478

木虫 (正式写手)
★ ★
xiaofan66(金币+2,VIP+0):咱们站内短信联系 6-22 16:22
比如你在混匀的时候，可能是激烈振荡，导致断裂，经常有这样的情况。
赞一下(3人) 回复此楼
朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
3楼2009-06-22 16:16:13
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
xiaofan66(金币+1,VIP+0): 6-22 17:10
我建议你做菌落pcr试试，要不就提细菌dna做模版
赞一下(4人) 回复此楼
4楼2009-06-22 16:40:51
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weilin2378

木虫 (小有名气)
★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
做菌液PCR时细菌的浓度不需要很大。我一般是摇菌3-5小时（大肠），然后取1微升菌液进行PCR（20微升体系）。
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5楼2009-06-22 20:33:33
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lifeip

至尊木虫 (知名作家)
★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
重新做一遍，只作一次或许说明不了多大问题。
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6楼2009-06-23 00:06:55
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林祎

木虫 (正式写手)
★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
MARKER 不清楚，建议重做
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7楼2009-06-23 00:19:15
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hahachina

金虫 (小有名气)
★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
菌液或菌落PCR很容易出现非特异带，关键是有没有目的条带。本来就是一种初步的鉴定方法，如有目的条带，可以继续鉴定。
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8楼2009-06-23 01:25:54
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yanlili

金虫 (正式写手)
★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
很简单，你的总DNA上有能与引物配对的序列，不知道你的退火温度是什么样的，改变退火温度是一个方法，出现这种情况也是比较正常的，菌液加少一点。出现这种情况可以抽质粒再pcr验证，这样很准确，而且可以进行双酶切验证。
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9楼2009-06-23 10:07:30
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louyiceng
★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
10楼2010-02-12 12:56:13
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