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xiaofan66

[交流] 菌液PCR后,出现非特异条带,是怎么回事?

蓝白斑筛选后,挑白斑进行菌液PCR后(PCR时,10uL体系,取1uL菌液作为模板),出现非特异条带(如图),我使用的是目的片段的引物,目的片段大约500bp,可是在2000bp以上,出现了明亮的条带,是哪步出现了问题?

由于是隔天照的照片,MARKER效果不好,条带在2000bp以上。

[ Last edited by 350784478 on 2009-6-22 at 16:09 ]
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350784478

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
xiaofan66(金币+1,VIP+0):能在具体些么,是哪一步操作剧烈了 6-22 16:14
xiaofan66(金币+1,VIP+0): 6-22 16:14
有可能是你太激烈吹打,导致你的目的基因条带某处断裂,随后经PCR,产生这样的结果。
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
2楼2009-06-22 16:12:16
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350784478

木虫 (正式写手)

★ ★
xiaofan66(金币+2,VIP+0):咱们站内短信联系 6-22 16:22
比如你在混匀的时候,可能是激烈振荡,导致断裂,经常有这样的情况。
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
3楼2009-06-22 16:16:13
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
xiaofan66(金币+1,VIP+0): 6-22 17:10
我建议你做菌落pcr试试,要不就提细菌dna做模版
4楼2009-06-22 16:40:51
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weilin2378

木虫 (小有名气)


xiaofan66(金币+1):谢谢参与
做菌液PCR时细菌的浓度不需要很大。我一般是摇菌3-5小时(大肠),然后取1微升菌液进行PCR(20微升体系)。
5楼2009-06-22 20:33:33
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lifeip

至尊木虫 (知名作家)


xiaofan66(金币+1):谢谢参与
重新做一遍,只作一次或许说明不了多大问题。
6楼2009-06-23 00:06:55
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林祎

木虫 (正式写手)


xiaofan66(金币+1):谢谢参与
MARKER 不清楚,建议重做
7楼2009-06-23 00:19:15
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hahachina

金虫 (小有名气)


xiaofan66(金币+1):谢谢参与
菌液或菌落PCR很容易出现非特异带,关键是有没有目的条带。本来就是一种初步的鉴定方法,如有目的条带,可以继续鉴定。
8楼2009-06-23 01:25:54
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yanlili

金虫 (正式写手)



xiaofan66(金币+1):谢谢参与
很简单,你的总DNA上有能与引物配对的序列,不知道你的退火温度是什么样的,改变退火温度是一个方法,出现这种情况也是比较正常的,菌液加少一点。出现这种情况可以抽质粒再pcr验证,这样很准确,而且可以进行双酶切验证。
9楼2009-06-23 10:07:30
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xiaofan66(金币+1):谢谢参与
10楼2010-02-12 12:56:13
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