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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR有目的条带，但是比较弱?
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

[交流] PCR有目的条带，但是比较弱?

今天刚跑完PCR，电泳后发现有目的条带，但是比Marker的带弱多了，没有Marker亮，以前做过，同样加3ul的量，条带应该亮度差不多，但是不知道为什么这次目的条带比较弱呀？

我把图粘贴上来了，在附件中，最左边的是Marker2000，然后依次左右都是样品孔，其中有三个孔几乎什么都没有，其他孔都还有，但是比较弱，大家帮我看看问题有可能出现在什么地方，谢谢！

[ Last edited by guoxingjun2008 on 2009-6-19 at 11:54 ]
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1楼 2009-06-17 17:50:49
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
可能酶的活力降低了
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2楼2009-06-17 18:01:53
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
或者模板量少了等原因
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3楼2009-06-17 18:02:27
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
没有非特异性扩增的话，可以多P几轮试试
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2009-06-17 18:17:49
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菊花茶

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
做了两次不可能一模一样的
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5楼2009-06-17 18:29:22
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gusubiao

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
影响PCR结果的因素太多了用枪的时候都会有很大的差别的
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6楼2009-06-17 19:38:57
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
可能是引物问题，不要紧，用pcr产物做pcr，电泳，再凝胶回收
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7楼2009-06-17 20:29:33
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我昨天做目的cDNA的RTPCR，结果做了两次，电泳3微升都没看出来，我又把PCR管放到PCR仪上，继续跑了15个循环，再电泳，出来了还挺亮，呵呵
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8楼2009-06-17 20:39:02
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ahui1883

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
做分子生物学的实验结果根本不可能是我们所控制的，只有不停的实验和摸索，而且有时候是靠运气的。呵呵
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海阔凭鱼跃，天高任鸟飞。
9楼2009-06-17 20:53:36
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)
我用的是35个循环，酶是新买的.应该不会有问题，到时候下午我把电泳图弄上来，大家帮我看看！
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10楼2009-06-18 10:59:02
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