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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

[交流] PCR有目的条带,但是比较弱?

今天刚跑完PCR,电泳后发现有目的条带,但是比Marker的带弱多了,没有Marker亮,以前做过,同样加3ul的量,条带应该亮度差不多,但是不知道为什么这次目的条带比较弱呀?

我把图粘贴上来了,在附件中,最左边的是Marker2000,然后依次左右都是样品孔,其中有三个孔几乎什么都没有,其他孔都还有,但是比较弱,大家帮我看看问题有可能出现在什么地方,谢谢!

[ Last edited by guoxingjun2008 on 2009-6-19 at 11:54 ]
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

可能酶的活力降低了
2楼2009-06-17 18:01:53
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

或者模板量少了等原因
3楼2009-06-17 18:02:27
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

没有非特异性扩增的话,可以多P几轮试试
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2009-06-17 18:17:49
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菊花茶

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
做了两次不可能一模一样的
5楼2009-06-17 18:29:22
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gusubiao

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
影响PCR结果的因素太多了用枪的时候都会有很大的差别的
6楼2009-06-17 19:38:57
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)

可能是引物问题,不要紧,用pcr产物做pcr,电泳,再凝胶回收
7楼2009-06-17 20:29:33
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gastrodia

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我昨天做目的cDNA的RTPCR,结果做了两次,电泳3微升都没看出来,我又把PCR管放到PCR仪上,继续跑了15个循环,再电泳,出来了还挺亮,呵呵
8楼2009-06-17 20:39:02
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ahui1883

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
做分子生物学的实验结果根本不可能是我们所控制的,只有不停的实验和摸索,而且有时候是靠运气的。呵呵
海阔凭鱼跃,天高任鸟飞。
9楼2009-06-17 20:53:36
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

我用的是35个循环,酶是新买的.应该不会有问题,到时候下午我把电泳图弄上来,大家帮我看看!
10楼2009-06-18 10:59:02
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