应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于使用自杀质粒pK18SacB进行敲除受体菌基因组上的相关片段
51/1返回列表
查看: 5125  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

supergrape

金虫 (小有名气)

[求助] 关于使用自杀质粒pK18SacB进行敲除受体菌基因组上的相关片段 已有2人参与

RT，我在前期将pK18SacB进行改造，把卡那霉素基因替换为氯霉素（受体菌带有卡那霉素抗性），左右同源臂的长度大小是在500bp左右，构建好的自杀载体pK18SacB是利用大肠杆菌S17进行接合转移，将滤膜上的菌体洗脱后涂到含有卡那霉素和氯霉素的培养基上。双抗板上确实长出疑似单交换的菌株（受体菌是假单胞菌，菌落形态与大肠杆菌不一样，很容易分辨），同时涂到双抗板上的受体菌没有长。问题是，当我用左同源臂的上游引物+右同源臂的下游引物进行菌落PCR验证，结果只有一左同源臂+右同源臂的目的条带，没有左同源臂+敲除片段+右同源臂的目的条带（PCR延伸时间是按照左同源臂+敲除片段+右同源臂的长度进行设置的）。随后，我设计了基因组上左同源臂的上游引物+自杀质粒中右同源臂下游引物进行pcr，结果没有相关目的条带（PCR延伸时间是按照左同源臂+敲除片段+右同源臂+300 bp的长度进行设置的）。恳请大佬解释一下，双抗板上的菌株是单交换的菌株吗？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2020-01-01 14:44:42
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

supergrape

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 狗狗狗尾巴草 at 2020-01-02 19:54:08
左同源臂的上游引物+右同源臂的下游引物 PCR 产物送测序，如果是你设计的同源臂，那应该是成功的

我一共做了20个菌落PCR，结果都只有左同源臂+右同源臂的目的条带。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2020-01-02 23:09:35
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

biosci

捐助贵宾 (职业作家)
随机整合的单交换

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2020-01-01 21:13:28
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

狗狗狗尾巴草

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与，应助指数 +1
supergrape: 金币+100, ★有帮助 2020-01-12 20:21:20
左同源臂的上游引物+右同源臂的下游引物 PCR 产物送测序，如果是你设计的同源臂，那应该是成功的
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

supergrape
3楼2020-01-02 19:54:08
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

supergrape

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2020-01-01 21:13:28
随机整合的单交换

随机整合的单交换会出现我基因组上原有的片段，即左同源臂+敲除片段+右同源臂

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2020-01-02 23:05:54
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 083000环境科学与工程调剂 +6 加油呀fxy 2026-03-07 7/350 2026-03-14 05:18 by JourneyLucky
[考研] 材料调剂 +5 xxxcm 2026-03-08 8/400 2026-03-14 03:33 by JourneyLucky
[考研] 313分生物学求调剂 +6 Yyt杨1 2026-03-09 8/400 2026-03-14 03:00 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +5 鹤遨予卿 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:44 by JourneyLucky
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-09 3/150 2026-03-14 01:57 by JourneyLucky
[考研] 318求调剂 +3 李新光 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:21 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂 +4 番茄头--- 2026-03-10 4/200 2026-03-13 23:12 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +5 邱gl 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:37 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] （081700）化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化，一志愿：哈工大 本人本科双一流 +3 自由的_飞翔 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:47 by 冠c哥
[考研] 274求调剂0856材料化工 +12 z2839474511 2026-03-11 13/650 2026-03-13 10:39 by peike
[考博] 2026博士申请 +7 起泡酒 2026-03-08 7/350 2026-03-13 09:56 by mumu真真
[考研] 283求调剂，材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
[基金申请] 国自科面上基金字体 +3 iwuli 2026-03-12 3/150 2026-03-12 22:43 by lfy8008
[考研] 289求调剂 +4 步川酷紫123 2026-03-11 4/200 2026-03-11 19:41 by peike
[考研] 298求调剂 +3 Vv呀！ 2026-03-10 3/150 2026-03-10 22:40 by 剑诗杜康
[考研] 一志愿：武汉理工，材料工程，英二数二 总分314 +3 2202020125 2026-03-10 4/200 2026-03-10 13:54 by xiongyaxuan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭