24小时热门版块排行榜    

查看: 1395  |  回复: 23
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xj22667

银虫 (小有名气)

[交流] 求助 Pfu酶PCR

我在用PCR扩增长约280bp的片段时,用Taq酶可以扩增出,但同样的体系和条件用Pfu酶却扩增不出目的片段,请问各位大侠这是什么原因?
由于我要克隆并表达这基因,且Taq酶的出错率较高,所以我一直不敢做下去,我该怎么办啊,救救我啊!

[ Last edited by xj22667 on 2009-6-12 at 13:55 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangtengxu

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
PFU酶不好
你换prime star试试
想和有趣的人一起做有趣的事。
24楼2009-07-27 09:07:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答

lynn5180

铜虫 (初入文坛)


sxdxrhyy(金币+1,VIP+0):谢谢参与讨论! 7-27 10:21
280bp就大胆的用rTAQ吧,然后多送几个测序,TAQ的突变率大概在千分之几
大不了用KOD不可能整不出来的
2楼2009-06-12 14:03:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
才280bp……无所谓的……只要控制循环数
Pfu的扩增能力是差点,需要降低点退火并且延长聚合时间
3楼2009-06-12 14:07:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xj22667

银虫 (小有名气)

上下游引物Tm值都是60度 我设的梯度60度 1min  58度1min 56度1min都扩不出来
应该怎么修改啊
4楼2009-06-12 14:12:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +9 majunge000 2026-08-11 11/550 2026-08-15 23:20 by botar
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +7 Ldrop2023 2026-08-13 7/350 2026-08-15 15:57 by mzhh2000
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见