应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助 Pfu酶PCR
241/3返回列表123下一页
查看: 1383  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

xj22667

银虫 (小有名气)

[交流] 求助 Pfu酶PCR

我在用PCR扩增长约280bp的片段时，用Taq酶可以扩增出，但同样的体系和条件用Pfu酶却扩增不出目的片段，请问各位大侠这是什么原因？
由于我要克隆并表达这基因，且Taq酶的出错率较高，所以我一直不敢做下去，我该怎么办啊，救救我啊！

[ Last edited by xj22667 on 2009-6-12 at 13:55 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-06-12 13:54:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lynn5180

铜虫 (初入文坛)
★
sxdxrhyy(金币+1,VIP+0):谢谢参与讨论！ 7-27 10:21
280bp就大胆的用rTAQ吧，然后多送几个测序，TAQ的突变率大概在千分之几
大不了用KOD不可能整不出来的
赞一下(10人) 回复此楼
2楼2009-06-12 14:03:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
才280bp……无所谓的……只要控制循环数
Pfu的扩增能力是差点，需要降低点退火并且延长聚合时间
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2009-06-12 14:07:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xj22667

银虫 (小有名气)
上下游引物Tm值都是60度 我设的梯度60度 1min  58度1min 56度1min都扩不出来
应该怎么修改啊
赞一下 回复此楼
4楼2009-06-12 14:12:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmchen1015

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
试一下53C 30s; 72C 40s ,如果不行再降一下温度
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2009-06-12 14:41:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xj22667

银虫 (小有名气)
谢谢 我去试试
回复此楼
6楼2009-06-12 15:14:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

njlf1258

确实仅280bp用一般的Taq就可以了，pfu酶扩增效率要大概低50%。
赞一下 回复此楼
7楼2009-06-12 15:56:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
很多pfu的温度都是68度吧
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2009-06-12 15:59:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xj22667

银虫 (小有名气)
让我犹豫没往下做是因为用Taq酶我做的阴性对照（用水代替模板）都能扩得出来
所以我觉的结果不可信啊
赞一下 回复此楼
9楼2009-06-12 16:13:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzm7806

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用rTaq不放心就用ExTaq试试，我扩1400bp的，用ExTaq，测序没有任何问题！
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2009-06-12 17:00:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xj22667 的主题更新
241/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 7lpolszZVXgi 2026-08-14 9/450 2026-08-15 17:46 by 7huP8NPKZCp9
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 17:42 by 7huP8NPKZCp9
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 HFw0lei2R37i 2026-08-14 6/300 2026-08-15 17:34 by 7huP8NPKZCp9
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +27 医学老男孩 2026-08-13 58/2900 2026-08-15 15:57 by GZUZM
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 14:58 by QXtWNz7PI7wZ
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 HFw0lei2R37i 2026-08-14 8/400 2026-08-15 14:41 by QXtWNz7PI7wZ
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 3/150 2026-08-15 12:41 by KxMI1BYBxWX1
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 3/150 2026-08-15 12:33 by KxMI1BYBxWX1
[基金申请] filecode +7 cratir 2026-08-14 11/550 2026-08-15 06:19 by 学员8dgXkO
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭