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xj22667

银虫 (小有名气)

[交流] 求助 Pfu酶PCR

我在用PCR扩增长约280bp的片段时,用Taq酶可以扩增出,但同样的体系和条件用Pfu酶却扩增不出目的片段,请问各位大侠这是什么原因?
由于我要克隆并表达这基因,且Taq酶的出错率较高,所以我一直不敢做下去,我该怎么办啊,救救我啊!

[ Last edited by xj22667 on 2009-6-12 at 13:55 ]
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xj22667

银虫 (小有名气)

上下游引物Tm值都是60度 我设的梯度60度 1min  58度1min 56度1min都扩不出来
应该怎么修改啊
4楼2009-06-12 14:12:03
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xj22667

银虫 (小有名气)

谢谢 我去试试
6楼2009-06-12 15:14:34
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xj22667

银虫 (小有名气)

让我犹豫没往下做是因为用Taq酶我做的阴性对照(用水代替模板)都能扩得出来
所以我觉的结果不可信啊
9楼2009-06-12 16:13:23
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xj22667

银虫 (小有名气)

好去试试 谢谢大家的热情帮助
14楼2009-06-12 18:47:32
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xj22667

银虫 (小有名气)

应该不是污染问题 换了新水也能扩出来
15楼2009-06-12 18:49:29
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xj22667

银虫 (小有名气)

我们实验室很多人做小片段PCR阴性对照都能扩出来
18楼2009-06-13 14:12:06
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