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xj22667

银虫 (小有名气)

[交流] 求助 Pfu酶PCR

我在用PCR扩增长约280bp的片段时,用Taq酶可以扩增出,但同样的体系和条件用Pfu酶却扩增不出目的片段,请问各位大侠这是什么原因?
由于我要克隆并表达这基因,且Taq酶的出错率较高,所以我一直不敢做下去,我该怎么办啊,救救我啊!

[ Last edited by xj22667 on 2009-6-12 at 13:55 ]
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smallcat227

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
CK有条带是试剂或者模板有污染,你可以逐一试验,也可以全部更换
pfu的扩增效率是要低很多,小片段就用普通的taq吧,不放心就多扩几次送测序,总有对的,不过测序也会有错就是
17楼2009-06-12 20:10:16
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lynn5180

铜虫 (初入文坛)


sxdxrhyy(金币+1,VIP+0):谢谢参与讨论! 7-27 10:21
280bp就大胆的用rTAQ吧,然后多送几个测序,TAQ的突变率大概在千分之几
大不了用KOD不可能整不出来的
2楼2009-06-12 14:03:25
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
才280bp……无所谓的……只要控制循环数
Pfu的扩增能力是差点,需要降低点退火并且延长聚合时间
3楼2009-06-12 14:07:03
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xj22667

银虫 (小有名气)

上下游引物Tm值都是60度 我设的梯度60度 1min  58度1min 56度1min都扩不出来
应该怎么修改啊
4楼2009-06-12 14:12:03
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