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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » pcr引物5‘端引入多长不相关的序列?
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frank7709

新虫 (正式写手)

[交流] pcr引物5‘端引入多长不相关的序列?

pcr引物5‘端可以最多引入多长和基因不相关的序列?

[ Last edited by amisking on 2009-6-12 at 07:59 ]
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1楼 2009-06-12 01:36:11
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lifeip

至尊木虫 (知名作家)
★
frank7709(金币+1):谢谢参与
可以长达几十bp，如做重叠引物延伸PCR法做突变引物，但常规以2~5bp为合适。
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2楼2009-06-12 02:18:36
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)
★
frank7709(金币+1):谢谢参与
我一般就加12个左右，如果作正常酶切的话，6个酶切位点 6个保护碱基。但和基因匹配的地方不能太短 最少 18
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3楼2009-06-12 06:03:48
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
我引入9个，没问题
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4楼2009-06-12 07:00:47
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
40个。。
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5楼2009-06-12 08:28:06
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我最多引入过25个，不过那次与模板匹配的有28个
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6楼2009-06-12 09:18:58
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
主要看你匹配部分会有多少，以及不匹配部分的2级结构
极端的话，像茎环引物，跟模板匹配就7个nt
而非匹配部分有三十几个nt
但是非匹配部分形成一个茎环结构
如此在热动力学上不容易从模板上掉下来
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7楼2009-06-12 09:47:41
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)
这个不好说吧，无非是条件控制。。。比如融合PCR产生的大片断好长呢。。。
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8楼2009-06-12 17:47:48
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ilaveu

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我引入了100bp没有任何问题！！！！！！
估计再多引入点都没有问题
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9楼2009-06-12 18:56:07
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andy03802

金虫 (小有名气)
我引入30个没问题，我感觉可以这么做，先用不含你需要引入的片段来扩，TA测序正确后，再用此质粒作为模板扩，引物换成有你需要引人的引物，这样可能更好扩，不过浪费时间
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10楼2009-06-13 16:13:24
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