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frank7709

新虫 (正式写手)

[交流] pcr引物5‘端引入多长不相关的序列?

pcr引物5‘端可以最多引入多长和基因不相关的序列?

[ Last edited by amisking on 2009-6-12 at 07:59 ]
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lifeip

至尊木虫 (知名作家)


frank7709(金币+1):谢谢参与
可以长达几十bp,如做重叠引物延伸PCR法做突变引物,但常规以2~5bp为合适。
2楼2009-06-12 02:18:36
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)


frank7709(金币+1):谢谢参与
我一般就加12个左右,如果作正常酶切的话,6个酶切位点 6个保护碱基。但和基因匹配的地方不能太短 最少 18
3楼2009-06-12 06:03:48
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)

我引入9个,没问题
4楼2009-06-12 07:00:47
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)

40个。。
5楼2009-06-12 08:28:06
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我最多引入过25个,不过那次与模板匹配的有28个
6楼2009-06-12 09:18:58
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

主要看你匹配部分会有多少,以及不匹配部分的2级结构
极端的话,像茎环引物,跟模板匹配就7个nt
而非匹配部分有三十几个nt
但是非匹配部分形成一个茎环结构
如此在热动力学上不容易从模板上掉下来
7楼2009-06-12 09:47:41
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)

这个不好说吧,无非是条件控制。。。比如融合PCR产生的大片断好长呢。。。
8楼2009-06-12 17:47:48
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ilaveu

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我引入了100bp没有任何问题!!!!!!
估计再多引入点都没有问题
9楼2009-06-12 18:56:07
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andy03802

金虫 (小有名气)

我引入30个没问题,我感觉可以这么做,先用不含你需要引入的片段来扩,TA测序正确后,再用此质粒作为模板扩,引物换成有你需要引人的引物,这样可能更好扩,不过浪费时间
10楼2009-06-13 16:13:24
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