应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 我的酵母基因组酶切问题在哪里？
121/2返回列表12下一页
查看: 556  |  回复: 11
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

gogagaover

新虫 (初入文坛)

[交流] 我的酵母基因组酶切问题在哪里？

我的酵母基因组酶切问题在哪里？
100微升酶切体系，图中分别为：1KB PLUS maker, BamH 1(4微升)，BamH 1(8微升)，Pst 1(3微升)，Pst1(6微升)，对照，对照。

专家们告诉我，我为什么不能把基因组切到1KB到10KB 之间？

求助！！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼2009-06-09 21:36:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

琉璃湖畔

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶切之后不是应该有两条带的吗？是不是酶失效了，没有切动~~
赞一下(1人) 回复此楼
淡定淡定，须知努力就好
2楼2009-06-09 21:38:45
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
根据对照判断，还是切了一些，可能只是发生部分酶切。酶切时间是多久啊？
这个胶的分辨率较低，充分酶切之后，是不是应该跑脉冲呢？（我也没做过，随便说的）
赞一下(1人) 回复此楼
漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
3楼2009-06-09 23:16:43
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
完全没切动……酶是不是失效了
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-06-09 23:19:19
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没完全切开，把酶切体系改到20或50微升试试
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2009-06-10 07:30:51
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gogagaover

新虫 (初入文坛)
谢谢楼上。

我的酶切体系是100UL，而且，切过夜。要说酶失效，有个师兄切质粒能切得很好。

我觉得还是酶没有选择好。

我想知道全基因组的电子酶切图谱，请问哪个高手能推荐一个网站？
赞一下 回复此楼
6楼2009-06-16 10:09:47
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biogefart

木虫 (著名写手)

切动了

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
都有smear了，把胶浓度降低看看，或者加大酶量
赞一下(1人) 回复此楼
闹太套
7楼2009-06-16 11:01:39
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 6-16 20:26
我觉得酶的量已经不少了，BamHI 8ul就80U了，不过真是奇怪了。我有两点建议：

1、下次跑基因组胶的时候跑0.8％的，酶切的最多跑1％的。

2、可以先摸索下酶的用量，具体方法类似于微生物操作中的梯度稀释，酶量和时间

在这里都可以作梯度。
赞一下(6人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
8楼2009-06-16 18:34:36
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gogagaover

新虫 (初入文坛)
谢谢各位高手。

我还是感觉我选的酶有问题，是不是我没有选到最合适的酶？

请问，如何得到酵母菌的物理图谱？
赞一下 回复此楼
9楼2009-06-17 15:23:40
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sammyyao

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看看能不能用Sau3AI切，那个能切的很碎的。另外我觉得可以少切点先试一下，DNA的量啥的都减小试试看。一般我们跑基因组的胶浓度会降低大概跑0.6％的胶，低压过夜。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2009-06-17 17:24:55
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gogagaover 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭