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gogagaover

新虫 (初入文坛)

[交流] 我的酵母基因组酶切问题在哪里?

我的酵母基因组酶切问题在哪里?
100微升酶切体系,图中分别为:1KB PLUS maker, BamH 1(4微升),BamH 1(8微升),Pst 1(3微升),Pst1(6微升),对照,对照。

专家们告诉我,我为什么不能把基因组切到1KB到10KB 之间?

求助!!!!
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 6-16 20:26
我觉得酶的量已经不少了,BamHI 8ul就80U了,不过真是奇怪了。我有两点建议:

1、下次跑基因组胶的时候跑0.8%的,酶切的最多跑1%的。

2、可以先摸索下酶的用量,具体方法类似于微生物操作中的梯度稀释,酶量和时间

在这里都可以作梯度。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
8楼2009-06-16 18:34:36
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琉璃湖畔

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
酶切之后不是应该有两条带的吗?是不是酶失效了,没有切动~~
淡定淡定,须知努力就好
2楼2009-06-09 21:38:45
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
根据对照判断,还是切了一些,可能只是发生部分酶切。酶切时间是多久啊?
这个胶的分辨率较低,充分酶切之后,是不是应该跑脉冲呢?(我也没做过,随便说的)
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
3楼2009-06-09 23:16:43
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
完全没切动……酶是不是失效了
4楼2009-06-09 23:19:19
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