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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 实验技术 » 分类鉴定用COI，提取出来很不稳定，今天能P出来，明天就不行了，怎么回事呢？
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doranicole

银虫 (小有名气)

[求助] 分类鉴定用COI，提取出来很不稳定，今天能P出来，明天就不行了，怎么回事呢？ 已有2人参与

用COI进行物种分类鉴定，提取DNA后扩增，当天能跑出来，保存至-20度，第二天就不能扩增出来了，不知道是因为COI太不稳定还是别的什么原因呢？请大神指教。@starseacow
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1楼 2019-11-04 10:51:39
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致加西亚的信

新虫 (小有名气)
说的具体点，类群，引物，pcr参数都是啥

发自小木虫Android客户端
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6楼2021-03-12 10:40:46
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无知的小强

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
还是植物好: 金币+5, 积极应助 2020-06-12 17:29:26
COI扩增挺稳定的，考虑是不是PCR过程设置不对？

如果过程没有问题，可以考虑换对引物试试
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Behind the mask is an idea, and ideas are bulletproof.
2楼2019-12-24 13:25:09
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nmhsd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
还是植物好: 金币+5, 应助指数+1, 积极应助 2020-05-25 17:20:38
有些PCR不稳定：目标高GC的，DNA富含PCR抑制剂的，长PCR反应（超过2kb），引物容易产物二聚体的，DNA聚合酶活性不封闭的（非热启动），引物3’位于SNP位点的，等等。所以请提供PCR条件（实验目的+DNA来源+PCR体系+PCR程序+引物序列）及电泳图谱，我才能具体分析。
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3楼2020-05-10 14:54:06
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他山石01

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
还是植物好: 金币+5, 积极应助 2020-06-12 17:29:38
可以直接用高通量来，更稳定，效果更好
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4楼2020-06-04 22:49:01
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