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找自己123

铁虫 (小有名气)

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虫号: 2169075

[交流] 原核表达蛋白进行可溶性分析时关于细胞裂解的问题

原核表达蛋白后，要做蛋白的可溶性分析，无论用超生破碎还是裂解液，上清中总是没有任何条带，正常情况即使表达的蛋白是包涵体，上清中应该也有其他的条带呀，请问该怎么处理？

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1楼 2019-10-29 23:01:25

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biosci

捐助贵宾 (职业作家)

应助: 188 (高中生)
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帖子: 4985
在线: 252.8小时
虫号: 2277351

★
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表达量太低了,结构基因需要优化

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6楼2019-10-30 10:59:29

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

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13297913532

新虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 33.4
帖子: 620
在线: 84.2小时
虫号: 4464699

★
找自己123(金币+1): 谢谢参与

纯属猜测，是不是加的裂解液太多，条带其实是有的，只是太淡了。

发自小木虫IOS客户端

3楼2019-10-29 23:31:57

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

生物二牛

铁虫 (初入文坛)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 102.8
帖子: 25
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虫号: 4350635

★
找自己123(金币+1): 谢谢参与

可能是超声破碎不完全，可以适当增加超声功率，超声时间也可适当延长，另外增加蛋白酶抑制剂，防止蛋白降解。

8楼2019-11-01 14:58:29

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

请叫我关关

铜虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 68.6
帖子: 25
在线: 7.4小时
虫号: 3993670

★
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上清中一定会有蛋白表达吗？我做的上清中几乎看不出来条带，全在包涵体里，请问你解决这个问题了吗？如果包涵体蛋白的话，复性后对蛋白结构影响大吗？

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10楼2019-11-05 14:23:22

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taro14楼

2019-10-30 00:13 回复

找自己123(金币+1): 谢谢参与

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