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木冰衿→_→

新虫 (正式写手)

[求助] 衡量催化能力的话,请问酶活和比酶活我应该看哪个指标呢? 已有2人参与

最近在全物种找催化能力最强的某种酶,想大肠杆菌表达出酶做催化,但是不知道应该看哪个指标才能衡量催化能力。
1. 得到的指导是说看SPECIFIC ACTIVITY 也就是比活,但是我查了下比活是衡量纯度的指标,用在这里是否不妥?
2. 因为我催化想用粗酶液,而查到的文献大多用纯化后的酶测量的数据,所以提纯过和没提纯过的酶的比活是否不同?文献的数据是否有参考意义?
3. 如果不能用比活,那么我应该查找什么指标衡量酶的催化能力?@hc-material
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

如果是作为酶催化能力的体现,当然是要选择酶活来衡量,包括在实际的工业生产应用中,计算酶使用量的时候,一般都是催化一定量的底物,需要多少酶活来计算,不会使用比活力。
       也如你所讲,比活在某种意义上就是一个纯度的体现,即每单位酶产品所具有的酶活,打个比方,一个反应需要1000U的酶,你用比活力低的粗酶液,可能需要加入10g的量才能达到酶活总量(比活是100U/g),而如果使用比活较高的纯化后蛋白,纯度高,单位质量含有的酶蛋白量要比粗酶液高,可能加个1g就可以了(比活是1000U/g)。
       而目前工业酶的使用中,很少使用纯化后的蛋白,成本太高,绝大多数还是使用粗酶液或者粗酶粉,你看的文献都是科研院所实验室进行科学研究的成果,他们不考虑成本的,可以使用昂贵的纯化填料以及设备等等,为的是获得一个准确的理论研究数据,比活越高证明他们获得的产品纯度或者含量越高。但实际应用中,还是需要考虑各种实际成本(附加值高的产品除外)。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2020-01-15 10:06:03
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木冰衿→_→

新虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2020-01-15 10:06:03
如果是作为酶催化能力的体现,当然是要选择酶活来衡量,包括在实际的工业生产应用中,计算酶使用量的时候,一般都是催化一定量的底物,需要多少酶活来计算,不会使用比活力。
       也如你所讲,比活在某种意义上 ...

谢谢

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3楼2020-01-15 17:06:53
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aliaa2019

金虫 (正式写手)

最关键的是看Km值,不是比活,我是生产酶的工厂:只要酶有活性就是有酶活,就不用检测这个指标了,除非你生产的没有活性~比活是酶纯度的意思:1mg广义上的酶(冻干酶里面有缓冲盐份),有多少酶单位;对于底物确定的酶,酶的质量若要好看Km:达到最大反应速度一半时底物的浓度

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4楼2020-05-19 14:24:03
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aliaa2019

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

最关键的是看Km值,不是比活,我是生产酶的工厂:只要酶有活性就是有酶活,就不用检测这个指标了,除非你生产的没有活性~比活是酶纯度的意思:1mg广义上的酶(冻干酶里面有缓冲盐份),有多少酶单位;对于底物确定的酶,酶的质量若要好看Km:达到最大反应速度一半时底物的浓度

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5楼2020-05-19 14:24:39
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aliaa2019

金虫 (正式写手)

以后做酶,Km你会关注最多的

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6楼2020-05-19 14:25:30
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