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质粒大提加入异丙醇没有沉淀已有1人参与
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今天用QIAGEN 的MEGA 试剂盒做了大提，在洗脱液加入异丙醇后可以见到有玻璃状的东西漂浮，然后我在4度冰箱里放置了大概两个多小时后再12000rpm ，30min，4度 离心后管壁什么都没有，我把液体倒出来看也没看到有沉淀，之后用70%乙醇洗涤同样条件离心后发现也什么都没有，想请问问题到底出在哪里呢？查了资料也看到说是因为我的异丙醇和我的洗脱液没有混匀，但也不可能一点沉淀也没有吧，这个是否和离心管也有关？我用的高速离心用的圆底的厚壁离心管，加上异丙醇沉淀的质粒DNA 本身就是吸附不牢靠所以被倒出来了，不过我在我倒出来的液体里也真没看到任何沉淀物，或者是我洗脱的质粒DNA 量本来就不够？！这个试剂盒的过柱太麻烦了，做了一天没有东西希望大家提点意见！卑微.jpg 发自小木虫IOS客户端 |
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2楼2019-09-27 22:44:02
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-09-28 22:47:12
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-09-28 22:47:12
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你的菌没问题吧，用试剂盒一般都没什么问题啊，小提能提出来不，要不换个试剂盒试试？ 发自小木虫Android客户端 |
3楼2019-09-28 04:36:59
huimukao
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4楼2019-09-28 09:11:14
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菌我觉得有问题当时小摇后换大摇是500ml LB 加到500ml锥形瓶里，离心后菌液沉淀大概1.6g/L ，颜色也是灰棕色的那种，之前用这个菌中提产量还是可以的。 试剂盒……过期了的，不过我用P 1，P2，P3感觉是有用的，我怀疑是洗脱DNA 那里的buffer 有问题 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2019-09-28 09:21:34
6楼2019-09-28 09:23:50
huimukao
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7楼2019-09-28 09:33:39
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-09-28 22:47:25
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-09-28 22:47:25
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要不你试试小提的试剂盒怎么样，有可能你的菌被污染了，带目的质粒的已经不是优势菌种了，或者忘加抗生素了？不确定的试剂还是别用了，做实验可不能图省钱啊，时间浪费不起 发自小木虫Android客户端 |
8楼2019-09-28 09:35:33
9楼2019-09-29 10:41:18
小小小青虫
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10楼2019-10-28 11:26:33