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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒大提加入异丙醇没有沉淀
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周霸霸霸

新虫 (小有名气)

[求助] 质粒大提加入异丙醇没有沉淀 已有1人参与

今天用QIAGEN 的MEGA 试剂盒做了大提，在洗脱液加入异丙醇后可以见到有玻璃状的东西漂浮，然后我在4度冰箱里放置了大概两个多小时后再12000rpm ，30min，4度 离心后管壁什么都没有，我把液体倒出来看也没看到有沉淀，之后用70%乙醇洗涤同样条件离心后发现也什么都没有，想请问问题到底出在哪里呢？查了资料也看到说是因为我的异丙醇和我的洗脱液没有混匀，但也不可能一点沉淀也没有吧，这个是否和离心管也有关？我用的高速离心用的圆底的厚壁离心管，加上异丙醇沉淀的质粒DNA 本身就是吸附不牢靠所以被倒出来了，不过我在我倒出来的液体里也真没看到任何沉淀物，或者是我洗脱的质粒DNA 量本来就不够？！这个试剂盒的过柱太麻烦了，做了一天没有东西希望大家提点意见！卑微.jpg

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1楼 2019-09-27 22:42:29
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周霸霸霸

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gfgva at 2019-09-28 09:35:33
要不你试试小提的试剂盒怎么样，有可能你的菌被污染了，带目的质粒的已经不是优势菌种了，或者忘加抗生素了？不确定的试剂还是别用了，做实验可不能图省钱啊，时间浪费不起
...

抗生素Amp 肯定是按照平常的1‰加了的，我觉得可能是我的培养锥形瓶体积太小了，导致菌缺氧都死了
你说得对，不能图省钱，实验时间浪费不起

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9楼2019-09-29 10:41:18
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周霸霸霸

新虫 (小有名气)
第一次发帖就把今天签到的5块金币捐出去了，全部身家了
这个除了签到怎么得金币哇

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2楼2019-09-27 22:44:02
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gfgva

木虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-09-28 22:47:12
你的菌没问题吧，用试剂盒一般都没什么问题啊，小提能提出来不，要不换个试剂盒试试？

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3楼2019-09-28 04:36:59
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huimukao

无虫 (小有名气)
史上最萌女汉子

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4楼2019-09-28 09:11:14
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