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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于电泳问题
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一生随袁

木虫 (正式写手)

[交流] 关于电泳问题

我想请教一个问题 蛋白质 煮沸提取 怎么跑不出带来 不过 蛋白质 做SDS-PAGE的时候 不是 上样以前 也加热与SDS结合 处理    为什么后者能跑出带， 而前者则没有带呢 ？
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1楼 2009-06-03 20:36:08
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jin56419303

木虫 (小有名气)
楼主说的不清楚，煮沸单纯作为破菌也是可以，但是蛋白肯定容易被降解，要是跑SDS-PAGE的话需要先加SDS辅助裂菌效果才好
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5楼2009-06-04 15:28:18
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baisuilan

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 6-3 21:50
一生随袁(金币+1,VIP+0): 6-5 06:40
煮沸的时候加没加SDS呢？直接煮沸法裂解细胞，我觉得裂解可能不完全吧。另外煮的太久也会使蛋白降解。通常的做法是先加裂解液裂解，离心取上清之后再加上样bufer煮
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2楼2009-06-03 21:43:51
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anik

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 6-3 21:50
一生随袁(金币+1,VIP+0): 6-5 06:40
引用回帖:
Originally posted by 一生随袁 at 2009-6-3 20:36:
我想请教一个问题 蛋白质 煮沸提取 怎么跑不出带来 不过 蛋白质 做SDS-PAGE的时候 不是 上样以前 也加热与SDS结合 处理    为什么后者能跑出带， 而前者则没有带呢 ？

没看明白你的问题。

上样前煮沸是为了让蛋白变性，但是如果你要做质谱，蛋白样品是不能煮沸的。
煮不煮与你能不能跑的出条带是没有关系的。
不过，告诉你一个快速看胶的方法，不必完全脱色，染色半个多小时后立即放入开水中煮，直到能看到条带为止。但是，如果你要做质谱，还是老老实实的脱色。。。。
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3楼2009-06-03 21:49:16
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)
1. 没有看的很明白2.煮沸蛋白质指什么？3. SDS-PAGE有条带说明肯定是有蛋白的
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4楼2009-06-03 21:50:11
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