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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 单酶切质粒（3-10Kb）问题请教
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zhlq_mail

铜虫 (小有名气)

[交流] 单酶切质粒（3-10Kb）问题请教

我想切3-10Kb质粒一个，BamH I和Ecol R 分别酶切，请问酶切时间1-2H好那还是过夜好，过夜酶切会产生影响吗？会出现弥散条带吗？请有经验者帮忙!
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1楼 2009-06-03 14:07:56
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)
你说的两种酶的活性都比较强，一般1到2小时就够了，如果切的情况不是很好，可以适当的延长时间，时间过长就不好了。希望对你有帮助。
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2楼2009-06-03 14:13:00
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ilaveu

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
2个酶都很好用，2个小时足够
过夜切没必要
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3楼2009-06-03 15:37:28
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 6-3 16:26
按照酶活定义去切就好了
1ug 质粒
1U 酶
切1h
当然是用NEB或者相当级别的酶
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4楼2009-06-03 16:25:27
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zhlq_mail

铜虫 (小有名气)
多谢各位
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5楼2009-06-03 18:11:56
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这两个酶都有星活性的，建议还是分步酶切，或者在通用Buffer中酶切时间短一些，我就使用这两个酶双酶切的，切了90min，效果很好的。
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6楼2009-06-03 20:04:34
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anik

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
为何做单酶切？Eco I可以和绝大多数酶进行双酶切的阿。
酶切两个小时即可。
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7楼2009-06-03 21:55:16
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yuanfeng

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
双酶切应该可以啊 2个小时应该可以了
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8楼2009-06-03 22:01:21
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695

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一般的1-2个小时就足够了，准楼准顺利
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9楼2009-06-03 23:37:57
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rest_cjt

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-6-3 16:25:
按照酶活定义去切就好了
1ug 质粒
1U 酶
切1h
当然是用NEB或者相当级别的酶

质粒的质量怎么定？跑电泳照胶和ladder比对用软件分析？
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10楼2009-06-04 01:29:40
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