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zhlq_mail

铜虫 (小有名气)

[交流] 单酶切质粒(3-10Kb)问题请教

我想切3-10Kb质粒一个,BamH I和Ecol R 分别酶切,请问酶切时间1-2H好那还是过夜好,过夜酶切会产生影响吗?会出现弥散条带吗?请有经验者帮忙!
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这两个酶都有星活性的,建议还是分步酶切,或者在通用Buffer中酶切时间短一些,我就使用这两个酶双酶切的,切了90min,效果很好的。
6楼2009-06-03 20:04:34
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查看全部 14 个回答

大海一孤舟

铜虫 (小有名气)

你说的两种酶的活性都比较强,一般1到2小时就够了,如果切的情况不是很好,可以适当的延长时间,时间过长就不好了。希望对你有帮助。
2楼2009-06-03 14:13:00
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ilaveu

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
2个酶都很好用,2个小时足够
过夜切没必要
3楼2009-06-03 15:37:28
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 6-3 16:26
按照酶活定义去切就好了
1ug 质粒
1U 酶
切1h
当然是用NEB或者相当级别的酶
4楼2009-06-03 16:25:27
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