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zhlq_mail

铜虫 (小有名气)

[交流] 单酶切质粒(3-10Kb)问题请教

我想切3-10Kb质粒一个,BamH I和Ecol R 分别酶切,请问酶切时间1-2H好那还是过夜好,过夜酶切会产生影响吗?会出现弥散条带吗?请有经验者帮忙!
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)

你说的两种酶的活性都比较强,一般1到2小时就够了,如果切的情况不是很好,可以适当的延长时间,时间过长就不好了。希望对你有帮助。
2楼2009-06-03 14:13:00
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ilaveu

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
2个酶都很好用,2个小时足够
过夜切没必要
3楼2009-06-03 15:37:28
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 6-3 16:26
按照酶活定义去切就好了
1ug 质粒
1U 酶
切1h
当然是用NEB或者相当级别的酶
4楼2009-06-03 16:25:27
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zhlq_mail

铜虫 (小有名气)

多谢各位
5楼2009-06-03 18:11:56
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这两个酶都有星活性的,建议还是分步酶切,或者在通用Buffer中酶切时间短一些,我就使用这两个酶双酶切的,切了90min,效果很好的。
6楼2009-06-03 20:04:34
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anik

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
为何做单酶切?Eco I可以和绝大多数酶进行双酶切的阿。
酶切两个小时即可。
7楼2009-06-03 21:55:16
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yuanfeng

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
双酶切应该可以啊 2个小时应该可以了
8楼2009-06-03 22:01:21
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695

木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一般的1-2个小时就足够了,准楼准顺利
9楼2009-06-03 23:37:57
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rest_cjt

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-6-3 16:25:
按照酶活定义去切就好了
1ug 质粒
1U 酶
切1h
当然是用NEB或者相当级别的酶

质粒的质量怎么定?跑电泳照胶和ladder比对用软件分析?
10楼2009-06-04 01:29:40
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