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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DNA降解问题求助！
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zhlq_mail

铜虫 (小有名气)

[交流] DNA降解问题求助！

我在试验中经常碰到有人问我引物和DNA反复冻融和使用对试验有无影响？为什么有影响？有什么影响？我无言，不知如何回答，请高手指教一二?


我的一师弟，ssr引物总是用，用完在桌子上放半天，可结果也没什么影响？无言！
另外,引物有必要在冰上融结在用吗？我有时比较急，直接用手暖或直接扔水浴锅里！
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1楼 2009-06-01 16:43:30
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jqq1985

银虫 (正式写手)
★
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我有一条引物用过大半年，不停地反复冻融，好像影响不是很大。
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2楼2009-06-01 18:55:24
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ilaveu

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
反复冻融可能会使DNA降解,但不是一定的
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3楼2009-06-01 19:04:11
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Charlie1331

金虫 (正式写手)
我的引物-20℃存了俩月就不行了……难道和RP有关？…………
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4楼2009-06-01 19:09:27
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再见苏摩

银虫 (初入文坛)
★
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一般试验影响不会很大，不过个人觉得养成良好的实验习惯比较好，有些实验是否成功可能就会受到这些细小动作的影响
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5楼2009-06-01 20:31:51
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350784478

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 6-1 20:57
对与DNA来说，一般影响不大，不过引物最好还是分装一下，从总的里面分出一点，比如几微升，然后把它稀释成工作浓度，每次只用这一管，用完之后，再进行稀释，那样比较好点。虽然说不容易降解，但是不怕一万，就怕万一降解了，那就全遭了，既浪费金钱，又浪费时间，你说是不？
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
6楼2009-06-01 20:51:40
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Milanmy

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
DNA是否容易降解和溶解DNA的溶剂有关，如果用水溶解，有一定的概率水是酸性，这样就容易引起DNA降解。所以一般用TE溶解比较好，除非用TE会影响影响后续试验。比如Qiagen DNeasy kit的Elution Buffer的是pH9.0的TE。引物最好用TE配成100mM的母液，用水或TE稀释成工作液使用。基因组DNA用TE溶解，储存在4度，反复冻融会造成DNA的断裂。
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7楼2009-06-01 21:45:04
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
反复冻融肯定是不好 但说有多大的影响 不好说 因为无论是引物还是模板都是有不同的 （保存体系及条件） 我做实验时 都是把所用的分装成小份 每份不用冻融几次就用完了 我建议你也这样
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海纳百川止于至善
8楼2009-06-01 21:51:21
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biogefart

木虫 (著名写手)

其实最重要的是无菌条件

★
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如果你在P3实验室操作，估计冻融多次也没有事，如果污染了微生物估计几周就完蛋了。
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闹太套
9楼2009-06-02 00:21:38
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同意楼上的说法，主要是看无菌条件，如果无菌好的话多次冻融也没什么问题的。
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10楼2009-06-02 09:19:28
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