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zhlq_mail

铜虫 (小有名气)

[交流] DNA降解问题求助!

我在试验中经常碰到有人问我引物和DNA反复冻融和使用对试验有无影响?为什么有影响?有什么影响?我无言,不知如何回答,请高手指教一二?


我的一师弟,ssr引物总是用,用完在桌子上放半天,可结果也没什么影响?无言!
另外,引物有必要在冰上融结在用吗?我有时比较急,直接用手暖或直接扔水浴锅里!
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Milanmy

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
DNA是否容易降解和溶解DNA的溶剂有关,如果用水溶解,有一定的概率水是酸性,这样就容易引起DNA降解。所以一般用TE溶解比较好,除非用TE会影响影响后续试验。比如Qiagen DNeasy kit的Elution Buffer的是pH9.0的TE。引物最好用TE配成100mM的母液,用水或TE稀释成工作液使用。基因组DNA用TE溶解,储存在4度,反复冻融会造成DNA的断裂。
7楼2009-06-01 21:45:04
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jqq1985

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我有一条引物用过大半年,不停地反复冻融,好像影响不是很大。
2楼2009-06-01 18:55:24
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ilaveu

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
反复冻融可能会使DNA降解,但不是一定的
3楼2009-06-01 19:04:11
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Charlie1331

金虫 (正式写手)

我的引物-20℃存了俩月就不行了……难道和RP有关?…………
4楼2009-06-01 19:09:27
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