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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DNA降解问题求助！
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njlf1258

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
反复冻融肯定是不好的！其主要原因大概来自这几个方面：
1.机械的剪切力。这主要是对长片段DNA尤其是基因组。
2.反复冻融容易造成污染，长菌。
3.容易造成DNase的污染。为什么一般保存DNA用TE buffer，主要是利用EDTA来抑制DNase。但EDTA也抑制 DNA polymerase和ligase，所以对引物或要做酶切、连接和测序的DNA用ddH2O来溶解。但对需要长期保存的DNA一般用TE或65%的乙醇来低温保存。
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11楼2009-06-02 10:47:08
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
按理讲反复冻融肯定是不好的，不过DNA相对比较稳定，一般问题不大，不过为保险起见还是建议分装，另外，长期保存的话最好用TE溶解，因EDTA是DNA酶的抑制剂，不过它同时也是Taq酶的潜在抑制剂……
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12楼2009-06-02 16:05:00
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zhlq_mail

铜虫 (小有名气)
★
amisking(金币+1,VIP+0):也欢迎你再发帖交流！ 6-2 17:50
多谢各位虫子的积极回复,本人受益匪浅,同时感谢小木虫给我提供这么好一个平台!!!由衷感谢!!!
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13楼2009-06-02 17:32:53
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Milanmy

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
Tris也是DNA酶的抑制剂，TE的离子强度很小，对PCR没有什么影响，除非特别敏感的后续试验。反复冻融引起降解的主要原因是溶液的pH值，偏酸就会降解，所以用缓冲液，这才是用TE的主要原因，建议看一下Roche的实验手册，小木虫就可以下！
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14楼2009-06-02 18:27:35
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juliahq

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
个人经验，引物和DNA用TE溶放在4度冰箱一段时间还是可以的，不过DNA还是放-20度比较可靠的；我们实验室PCR用的引物包括dNTP都是这样放的，一般不会有问题的
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15楼2009-06-03 23:20:55
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jin56419303

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一般问题不大，但是还是小心为好，当你发现这个真被降解的时候，至少会小郁闷的
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16楼2009-06-04 15:24:23
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