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zhlq_mail

铜虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 279.4
散金: 9
帖子: 131
在线: 35.2小时
虫号: 743904
注册: 2009-04-09
性别: GG
专业: 纳米生物学

[交流] DNA降解问题求助！

我在试验中经常碰到有人问我引物和DNA反复冻融和使用对试验有无影响？为什么有影响？有什么影响？我无言，不知如何回答，请高手指教一二?

我的一师弟，ssr引物总是用，用完在桌子上放半天，可结果也没什么影响？无言！
另外,引物有必要在冰上融结在用吗？我有时比较急，直接用手暖或直接扔水浴锅里！

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1楼 2009-06-01 16:43:30

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

njlf1258

应助: (幼儿园)
在线:
虫号: 324398

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

反复冻融肯定是不好的！其主要原因大概来自这几个方面：
1.机械的剪切力。这主要是对长片段DNA尤其是基因组。
2.反复冻融容易造成污染，长菌。
3.容易造成DNase的污染。为什么一般保存DNA用TE buffer，主要是利用EDTA来抑制DNase。但EDTA也抑制 DNA polymerase和ligase，所以对引物或要做酶切、连接和测序的DNA用ddH2O来溶解。但对需要长期保存的DNA一般用TE或65%的乙醇来低温保存。