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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DNA降解问题求助！
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zhlq_mail

铜虫 (小有名气)

[交流] DNA降解问题求助！

我在试验中经常碰到有人问我引物和DNA反复冻融和使用对试验有无影响？为什么有影响？有什么影响？我无言，不知如何回答，请高手指教一二?


我的一师弟，ssr引物总是用，用完在桌子上放半天，可结果也没什么影响？无言！
另外,引物有必要在冰上融结在用吗？我有时比较急，直接用手暖或直接扔水浴锅里！
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1楼 2009-06-01 16:43:30
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njlf1258

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
反复冻融肯定是不好的！其主要原因大概来自这几个方面：
1.机械的剪切力。这主要是对长片段DNA尤其是基因组。
2.反复冻融容易造成污染，长菌。
3.容易造成DNase的污染。为什么一般保存DNA用TE buffer，主要是利用EDTA来抑制DNase。但EDTA也抑制 DNA polymerase和ligase，所以对引物或要做酶切、连接和测序的DNA用ddH2O来溶解。但对需要长期保存的DNA一般用TE或65%的乙醇来低温保存。
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11楼2009-06-02 10:47:08
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jqq1985

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我有一条引物用过大半年，不停地反复冻融，好像影响不是很大。
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2楼2009-06-01 18:55:24
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ilaveu

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
反复冻融可能会使DNA降解,但不是一定的
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3楼2009-06-01 19:04:11
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Charlie1331

金虫 (正式写手)
我的引物-20℃存了俩月就不行了……难道和RP有关？…………
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4楼2009-06-01 19:09:27
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