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nicole-feng

新虫 (初入文坛)

[交流] 紧急求助:DNA PAGE求助!!!

!!!急

刚做这方面的实验,跑胶、染色一塌糊涂,忘有经验有耐心的各位兄弟姐妹给俺回答回答:

我现在有两条合成的随机引物,均为92bp,因为要转录RNA文库用的,所以就想在转录之前看看合成的质量,偶就想用PAGE检验一下,俺用了40% 19:1的丙烯酰胺混合液+Urea+TBE 跑了块175*200mm的凝胶(跑的高压胶),后来银染的过程中在第一步Fixing时胶就全部烂掉了. 这个胶太黏了,彻底胶状。。。很不好处理。。。
ps:如果我只是想看看合成的是否基本上是理想长度的引物,那是否可以用30的混合液配小胶,电压也用一般的跑呢?
不胜感激!
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)

胶应该是有点问题,我记得浓度在12%时就很好了,不容易坏的
3楼2009-06-01 12:22:42
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
30%的可以啊,最终PAGE胶浓度为15%即可
然后用预冷的TBE跑,如果怕降解就放冰上电泳
2楼2009-06-01 10:26:56
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jqq1985

银虫 (正式写手)

引物单子上跑引物的图不都是15%的尿素胶吗
4楼2009-06-01 18:58:55
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nicole-feng

新虫 (初入文坛)

确实胶有点问题,解决了这个问题了。但是银染效果差,目的的条带上面很大一团拖尾的。。不知道是啥。。而且样品带染出来不是像marker一样是棕褐色(marker也没有拖尾现象),而是棕红色,还有背景有点暗茶色的感觉,这些可能是啥原因造成的?我已经很注意各方面了。。
5楼2009-06-08 20:49:33
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