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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 紧急求助：DNA PAGE求助！！！
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nicole-feng

新虫 (初入文坛)

[交流] 紧急求助：DNA PAGE求助！！！

！！！急

刚做这方面的实验，跑胶、染色一塌糊涂，忘有经验有耐心的各位兄弟姐妹给俺回答回答：

我现在有两条合成的随机引物，均为92bp，因为要转录RNA文库用的，所以就想在转录之前看看合成的质量，偶就想用PAGE检验一下，俺用了40% 19:1的丙烯酰胺混合液+Urea+TBE 跑了块175*200mm的凝胶（跑的高压胶），后来银染的过程中在第一步Fixing时胶就全部烂掉了. 这个胶太黏了，彻底胶状。。。很不好处理。。。
ps：如果我只是想看看合成的是否基本上是理想长度的引物，那是否可以用30的混合液配小胶，电压也用一般的跑呢？
不胜感激！
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1楼 2009-06-01 10:23:25
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
30%的可以啊，最终PAGE胶浓度为15%即可
然后用预冷的TBE跑，如果怕降解就放冰上电泳
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2楼2009-06-01 10:26:56
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)
胶应该是有点问题，我记得浓度在12%时就很好了，不容易坏的
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3楼2009-06-01 12:22:42
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jqq1985

银虫 (正式写手)
引物单子上跑引物的图不都是15%的尿素胶吗
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4楼2009-06-01 18:58:55
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nicole-feng

新虫 (初入文坛)
确实胶有点问题，解决了这个问题了。但是银染效果差，目的的条带上面很大一团拖尾的。。不知道是啥。。而且样品带染出来不是像marker一样是棕褐色（marker也没有拖尾现象），而是棕红色，还有背景有点暗茶色的感觉，这些可能是啥原因造成的？我已经很注意各方面了。。
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5楼2009-06-08 20:49:33
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nicole-feng

新虫 (初入文坛)
。。。我真鄙视我自己。。而且那一大团拖尾的东西染色时是有点应光亮的感觉的。。。
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6楼2009-06-08 20:51:55
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