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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » GST标签融合蛋白纯化所用的binding buffer以及elution buffer中DTT如何加？
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菱霖飞飞飞

新虫 (初入文坛)

[求助] GST标签融合蛋白纯化所用的binding buffer以及elution buffer中DTT如何加？

GST纯化柱的protocol中显示的结合缓冲液为PBS，洗脱缓冲液则为pH=8.0 50mM Tris-HCl +10mM 还原型谷胱甘肽。
        其中，注意事项原文是这么说的：结合缓冲液或者洗脱缓冲液中可加入1-10mM DTT。这句话意思是说结合缓冲液或者洗脱缓冲液两者选其一加DTT吗？，若只在洗脱缓冲液中加DTT，会不会对还原性谷胱甘肽有影响？大家这种情况下一般是怎么使用DTT的呢？
        另外，洗脱缓冲液可以由tris-hcl改为在PBS中加入10mM 还原型谷胱甘肽吗？因为用tris-hcl作储存液纯化得到的蛋白做EMSA实验结合不是很明显。
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1楼 2019-08-19 11:16:18
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夺命十三幺

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 菱霖飞飞飞 at 2019-08-26 10:19:15
我没切，您知道我的这个问题中DTT在哪种溶液中加入吗？...

我是在两种Buffer中都加了 这个应该没有影响

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4楼2019-08-26 14:37:32
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夺命十三幺

新虫 (小有名气)
请问你的GST标签切除了吗，我用的TEV酶一点也切不下来

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2楼2019-08-25 12:24:06
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菱霖飞飞飞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 夺命十三幺 at 2019-08-25 12:24:06
请问你的GST标签切除了吗，我用的TEV酶一点也切不下来

我没切，您知道我的这个问题中DTT在哪种溶液中加入吗？
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3楼2019-08-26 10:19:15
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DrawWon

新虫 (初入文坛)
您好，您换用PBS作储存液做EMSA了么？效果咋样。
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5楼2022-01-17 11:12:33
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