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weeqiang铜虫 (小有名气)
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[交流]
【求助】玉米cDNA长片段扩增问题
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在NCBI上找到了该基因的mRNA全长，根据全长设计了引物，全长2500bp，提取了RNA反转录为cDNA进行扩增，摸索了很多条件总是扩不出来，一点条带都看不到，这个基因的的表达量很低，也不知道有些什么问题，希望能得到各位虫友的帮助，我是新手有些都不是很懂.... [ Last edited by amisking on 2009-6-1 at 13:24 ] |
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8楼2009-06-01 16:10:52
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amisking(金币+0,VIP+0):欢迎发帖交流！ 6-1 22:10
weeqiang(金币+1,VIP+0):我用的就是 Random还是多换换条件吧，我准备选择不同植物的这个基因，进行比对，找到保守性较强的一段设计一对引物不知道行不行 6-2 13:36
amisking(金币+0,VIP+0):欢迎发帖交流！ 6-1 22:10
weeqiang(金币+1,VIP+0):我用的就是 Random还是多换换条件吧，我准备选择不同植物的这个基因，进行比对，找到保守性较强的一段设计一对引物不知道行不行 6-2 13:36
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不知道你用什么引物做的RT，建议用Random做一下，可能长度大一点的会有一些二级结构。有的基因用OligodT效果比较好，有的用Random效果好。如果还扩不出来建议换个位点重新设计引物。我们遇到过和你相似的情况，重设计引物后就扩出来了。 [ Last edited by Milanmy on 2009-6-1 at 22:04 ] |
9楼2009-06-01 21:58:37
10楼2009-06-02 18:21:52