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weeqiang

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助】玉米cDNA长片段扩增问题

在NCBI上找到了该基因的mRNA全长,根据全长设计了引物,全长2500bp,提取了RNA反转录为cDNA进行扩增,摸索了很多条件总是扩不出来,一点条带都看不到,这个基因的的表达量很低,也不知道有些什么问题,希望能得到各位虫友的帮助,我是新手有些都不是很懂....

[ Last edited by amisking on 2009-6-1 at 13:24 ]
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ilaveu

木虫 (著名写手)

确实,实验有偶然性,找个实验高手代你做一下可能会出来
3楼2009-05-31 23:10:05
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350784478

木虫 (正式写手)


weeqiang(金币+1,VIP+0):非常感谢 6-1 13:22
我也遇到和你一样的问题,你要是还扩增不出来,那就找其他人帮你提取一下。我的情况就是这样,提取mRNA都挺好的,但是就是扩增不出PCR产物,最后我找了其他人帮我提了一次,然后也用她的试剂帮我跑了一次PCR,结果就出来了,你可以试一下。
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
2楼2009-05-31 22:37:38
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weeqiang

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 350784478 at 2009-5-31 22:37:
我也遇到和你一样的问题,你要是还扩增不出来,那就找其他人帮你提取一下。我的情况就是这样,提取mRNA都挺好的,但是就是扩增不出PCR产物,最后我找了其他人帮我提了一次,然后也用她的试剂帮我跑了一次PCR,结果 ...

会不会和表达量有关呢?
我用的酶是LA
4楼2009-06-01 13:22:04
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Milanmy

银虫 (小有名气)


weeqiang(金币+1,VIP+0):谢谢,我就是用的这个公司的反转录试剂盒,根据文献介绍我取的部位应该是有表达的,就是表达量非常低!还有就是长片段会不会不好扩 6-1 13:37
首先你得确定它在你提取RNA的组织中是表达的,其它就是RNA的提取质量,反转录酶的效率了,如果表达量很低的话,有条件就用Invitrogen的superscript III,这个酶是反转录效率最高的,其它的酶效率要差很多。
5楼2009-06-01 13:26:37
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