| 查看: 8460 | 回复: 13 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
关于无缝克隆的问题 已有9人参与
|
|||
|
嗯本人研一实验室小白一枚，因为是新建立的实验室，也木的师兄师姐带，所以来这里求助一下，顺便分享下我的经验 老师让我把一个13000的基因搞到手 我搞了八个月了，先是分成七段，拿提的cdna当模板p，这些都是小事，后来的拼接最开始用的圣羽的，挺得劲把2+3连起来了，再后来就死活做不出来，做了各种对照，觉得是试剂盒的问题，就换了诺唯赞的，后来就把2+3 4+5 6+7都连起来了，然后连2+3+4+5用的感受态还是自己实验室做的dh5，挑菌用第三段尾端设计了个引物，第四段开始设计了个引物，跑出来500bp的带，也挑出来了。接下来就是1+2+3连起来，然后用当时2+3+4+5连接时的同源臂，顺利的把1+2+3+4+5连起来了，测序也对了。 现在的问题是我用诺唯赞的试剂盒死活做不出来了，简单的4+5+6+7都连不起来，同样的手法，操作，感受态换成了买的也是不行，一个多月了，本来已经想好方法只要把4567连上，我就有能力把1234567连上，但是现在做不出来，谁最近做过无缝克隆，有推荐的做出来的试剂盒没？neb的就算了，也买了做不出来。我可以分享我目前的经验。 目前就是9200片段+5000pcdna3.1测序正确 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有269人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
7楼2019-08-15 20:49:33
金平果
新虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 4586.5
- 红花: 5
- 沙发: 4
- 帖子: 1682
- 在线: 171.9小时
- 虫号: 6557232
- 注册: 2017-05-18
- 专业: 生物化学
2楼2019-08-14 23:07:17
wuhu0612331
铜虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 3526.1
- 散金: 221
- 红花: 16
- 帖子: 999
- 在线: 159.1小时
- 虫号: 3232337
- 注册: 2014-05-25
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
3楼2019-08-15 09:32:17
4楼2019-08-15 09:59:15
10