| 查看: 8908 | 回复: 13 | |||
[交流]
关于无缝克隆的问题 已有9人参与
|
|||
|
嗯本人研一实验室小白一枚，因为是新建立的实验室，也木的师兄师姐带，所以来这里求助一下，顺便分享下我的经验 老师让我把一个13000的基因搞到手 我搞了八个月了，先是分成七段，拿提的cdna当模板p，这些都是小事，后来的拼接最开始用的圣羽的，挺得劲把2+3连起来了，再后来就死活做不出来，做了各种对照，觉得是试剂盒的问题，就换了诺唯赞的，后来就把2+3 4+5 6+7都连起来了，然后连2+3+4+5用的感受态还是自己实验室做的dh5，挑菌用第三段尾端设计了个引物，第四段开始设计了个引物，跑出来500bp的带，也挑出来了。接下来就是1+2+3连起来，然后用当时2+3+4+5连接时的同源臂，顺利的把1+2+3+4+5连起来了，测序也对了。 现在的问题是我用诺唯赞的试剂盒死活做不出来了，简单的4+5+6+7都连不起来，同样的手法，操作，感受态换成了买的也是不行，一个多月了，本来已经想好方法只要把4567连上，我就有能力把1234567连上，但是现在做不出来，谁最近做过无缝克隆，有推荐的做出来的试剂盒没？neb的就算了，也买了做不出来。我可以分享我目前的经验。 目前就是9200片段+5000pcdna3.1测序正确 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有266人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
wuhu0612331
铜虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 3526.1
- 散金: 221
- 红花: 16
- 帖子: 999
- 在线: 159.1小时
- 虫号: 3232337
- 注册: 2014-05-25
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
3楼2019-08-15 09:32:17
算了。。。 8楼2019-08-20 15:31:44
金平果
新虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 4586.5
- 红花: 5
- 沙发: 4
- 帖子: 1682
- 在线: 171.9小时
- 虫号: 6557232
- 注册: 2017-05-18
- 专业: 生物化学
2楼2019-08-14 23:07:17
4楼2019-08-15 09:59:15
。 5楼2019-08-15 15:19:49
6楼2019-08-15 16:05:45
7楼2019-08-15 20:49:33
9楼2019-09-19 10:06:18
Lillian李
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 172.3
- 散金: 5
- 帖子: 79
- 在线: 12.6小时
- 虫号: 4660522
- 注册: 2016-05-05
- 性别: MM
- 专业: 果树学
10楼2020-05-20 22:16:13
40