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关于无缝克隆的问题 已有9人参与
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嗯本人研一实验室小白一枚，因为是新建立的实验室，也木的师兄师姐带，所以来这里求助一下，顺便分享下我的经验 老师让我把一个13000的基因搞到手 我搞了八个月了，先是分成七段，拿提的cdna当模板p，这些都是小事，后来的拼接最开始用的圣羽的，挺得劲把2+3连起来了，再后来就死活做不出来，做了各种对照，觉得是试剂盒的问题，就换了诺唯赞的，后来就把2+3 4+5 6+7都连起来了，然后连2+3+4+5用的感受态还是自己实验室做的dh5，挑菌用第三段尾端设计了个引物，第四段开始设计了个引物，跑出来500bp的带，也挑出来了。接下来就是1+2+3连起来，然后用当时2+3+4+5连接时的同源臂，顺利的把1+2+3+4+5连起来了，测序也对了。 现在的问题是我用诺唯赞的试剂盒死活做不出来了，简单的4+5+6+7都连不起来，同样的手法，操作，感受态换成了买的也是不行，一个多月了，本来已经想好方法只要把4567连上，我就有能力把1234567连上，但是现在做不出来，谁最近做过无缝克隆，有推荐的做出来的试剂盒没？neb的就算了，也买了做不出来。我可以分享我目前的经验。 目前就是9200片段+5000pcdna3.1测序正确 发自小木虫Android客户端 |
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