应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 跑qpcr其它目的基因的都出来了，就内参没有扩出来，该怎么办
491/1返回列表
查看: 3168  |  回复: 48
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

七叶漂漂

新虫 (著名写手)
已领完
跑qpcr其它目的基因的都出来了，就内参没有扩出来，该怎么办
领取红包 (小木虫手机app专属红包)

扫一扫，下载小木虫客户端

9月份开学就是研二的了，实验一直做不出来，很心急。目前做的实验是用LPS(脂多糖)刺激小胶质细胞，分四个时间点用qpcr检测炎症因子的表达量。引物是一开始是自己通过pubned上面招的，也会从文献里面找，叫公司合成之前，自己都会在pubmed上的primer-blast验证一下引物的分子量，选的都是都是100-300bp的，而且是转录本少或者没有的那种的序列。我的老师还要我做qpcr之前还要用引物和cCDA扩增一下，用来跑琼脂凝胶，看看分子量和blast上的分子量能不能对上，对上了，再做qpcr。我看了很多qpcr方面的资料，也问了一些做qpcr的同学，他们觉得没有必要跑琼脂糖凝胶去验证分子量，最多就是blast一下。我感觉也不用，因为每次我跑出来分子量基本都对的上。我老师说一定要验证，不然很可能得到的是假阳性的结果，也确实，很多高分文献里的引物序列，我输进primer-blast去，会出现很多条分子量不一样的转录本，有的甚至两三千的分子量。然后我叫一位师兄用olig7帮我设计了一些引物序列，也在blast验证过，都符合引物设计的原则，下面是昨天用新引物跑qpcr的结果。用的仪器是罗氏的lightclcler480，程序是两步法。
第一张图片是内参和三个目的基因的ct值；第二张是内参的溶解曲线；第三张是三个目的基因的溶解曲线；第四张和第五张分别是是内参和三个目的基因的扩增曲线。
希望走过路过的师兄师姐大佬能帮我看一看，分析一下，小弟感谢(??ω`?)！

跑qpcr其它目的基因的都出来了，就内参没有扩出来，该怎么办


跑qpcr其它目的基因的都出来了，就内参没有扩出来，该怎么办-1


跑qpcr其它目的基因的都出来了，就内参没有扩出来，该怎么办-2


跑qpcr其它目的基因的都出来了，就内参没有扩出来，该怎么办-3


跑qpcr其它目的基因的都出来了，就内参没有扩出来，该怎么办-4


发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼2019-08-08 11:42:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

困困的黄瓜

铁虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
找几个内参，先专门跑他们试试……合适了再用。没内参没意义

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
24楼2019-08-08 12:22:16
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

七叶漂漂

新虫 (著名写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2019-08-08 11:54:37
内参没问题吧？

我也说不清楚，没问题的话，怎么就内参跑不出来呢？我加样的手法都是一样的啊

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
48楼2019-08-08 13:16:37
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
内参没问题吧？

发自小木虫Android客户端
回复此楼
12楼2019-08-08 11:54:37
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wudi0729

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们以前做的还会把产物拿去测个序确认一下。小心驶得万年船。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
41楼2019-08-08 12:56:38
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

七叶漂漂

新虫 (著名写手)
引用回帖:
24楼: Originally posted by 困困的黄瓜 at 2019-08-08 12:22:16
找几个内参，先专门跑他们试试……合适了再用。没内参没意义

好的，谢谢

发自小木虫Android客户端
回复此楼
46楼2019-08-08 13:13:53
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

七叶漂漂

新虫 (著名写手)
引用回帖:
41楼: Originally posted by wudi0729 at 2019-08-08 12:56:38
我们以前做的还会把产物拿去测个序确认一下。小心驶得万年船。

嗯嗯，我昨天是把qpcr之后的产物拿来跑琼脂凝胶，紫外灯下看，内参的条带没有，三个目的基因的分子量和pubmed上面的能对上。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
47楼2019-08-08 13:15:45
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

哎呦喂啊加

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请教一下楼主，测熔解曲线怎么设置

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
49楼2021-09-22 13:38:28
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
hdchina20102楼
2019-08-08 11:42   回复  
七叶漂漂(金币+8): 谢谢参与
已获得8个金币 发自小木虫IOS客户端
yuying04213楼
2019-08-08 11:42   回复  
七叶漂漂(金币+5): 谢谢参与
已获得5个金币 发自小木虫Android客户端
。小角色。4楼
2019-08-08 11:43   回复  
七叶漂漂(金币+6): 谢谢参与
已获得6个金币 发自小木虫Android客户端
Sunnie20155楼
2019-08-08 11:43   回复  
七叶漂漂(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
9602136楼
2019-08-08 11:45   回复  
七叶漂漂(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫IOS客户端
回忆往昔7楼
2019-08-08 11:45   回复  
七叶漂漂(金币+3): 谢谢参与
已获得3个金币 发自小木虫Android客户端
大表哥的年8楼
2019-08-08 11:50   回复  
七叶漂漂(金币+5): 谢谢参与
已获得5个金币 发自小木虫Android客户端
走心ing9楼
2019-08-08 11:50   回复  
七叶漂漂(金币+3): 谢谢参与
已获得3个金币 发自小木虫Android客户端
nadp16310楼
2019-08-08 11:53   回复  
七叶漂漂(金币+4): 谢谢参与
已获得4个金币 发自小木虫Android客户端
西门吹雪17011楼
2019-08-08 11:53   回复  
七叶漂漂(金币+10): 谢谢参与
已获得10个金币 发自小木虫Android客户端
xqyqwy13楼
2019-08-08 12:04   回复  
七叶漂漂(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
ulr93866814楼
2019-08-08 12:04   回复  
七叶漂漂(金币+7): 谢谢参与
已获得7个金币 发自小木虫IOS客户端
etd14333315楼
2019-08-08 12:13   回复  
七叶漂漂(金币+9): 谢谢参与
已获得9个金币 发自小木虫IOS客户端
时空の幻想16楼
2019-08-08 12:16   回复  
七叶漂漂(金币+5): 谢谢参与
已获得5个金币 发自小木虫Android客户端
tsd39242217楼
2019-08-08 12:16   回复  
七叶漂漂(金币+7): 谢谢参与
已获得7个金币 发自小木虫IOS客户端
殷赋科技18楼
2019-08-08 12:17   回复  
七叶漂漂(金币+3): 谢谢参与
已获得3个金币 发自小木虫Android客户端
ggfguide19楼
2019-08-08 12:18   回复  
七叶漂漂(金币+4): 谢谢参与
已获得4个金币 发自小木虫Android客户端
zfpd276620楼
2019-08-08 12:19   回复  
七叶漂漂(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
86757596921楼
2019-08-08 12:19   回复  
七叶漂漂(金币+8): 谢谢参与
已获得8个金币 发自小木虫Android客户端
困困的黄瓜22楼
2019-08-08 12:21   回复  
七叶漂漂(金币+8): 谢谢参与
已获得8个金币 发自小木虫Android客户端
ayl62467623楼
2019-08-08 12:22   回复  
七叶漂漂(金币+9): 谢谢参与
已获得9个金币 发自小木虫IOS客户端
Nanfei00225楼
2019-08-08 12:23   回复  
七叶漂漂(金币+4): 谢谢参与
已获得4个金币 发自小木虫Android客户端
tzynew26楼
2019-08-08 12:23   回复  
七叶漂漂(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
Andy三木五岳27楼
2019-08-08 12:25   回复  
七叶漂漂(金币+7): 谢谢参与
已获得7个金币 发自小木虫IOS客户端
m_inter28楼
2019-08-08 12:28   回复  
七叶漂漂(金币+6): 谢谢参与
已获得6个金币 发自小木虫IOS客户端
被堵29楼
2019-08-08 12:28   回复  
七叶漂漂(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫IOS客户端
reggae30楼
2019-08-08 12:29   回复  
七叶漂漂(金币+3): 谢谢参与
已获得3个金币 发自小木虫IOS客户端
宁波大学～31楼
2019-08-08 12:30   回复  
七叶漂漂(金币+5): 谢谢参与
已获得5个金币 发自小木虫Android客户端
待鹰归来32楼
2019-08-08 12:33   回复  
七叶漂漂(金币+9): 谢谢参与
已获得9个金币 发自小木虫Android客户端
yekongdea33楼
2019-08-08 12:36   回复  
七叶漂漂(金币+8): 谢谢参与
已获得8个金币 发自小木虫Android客户端
xy65669134楼
2019-08-08 12:37   回复  
七叶漂漂(金币+8): 谢谢参与
已获得8个金币 发自小木虫Android客户端
cmj59582535楼
2019-08-08 12:37   回复  
七叶漂漂(金币+3): 谢谢参与
已获得3个金币 发自小木虫IOS客户端
秋土豆香36楼
2019-08-08 12:42   回复  
七叶漂漂(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
wxiaona37楼
2019-08-08 12:43   回复  
七叶漂漂(金币+4): 谢谢参与
已获得4个金币 发自小木虫IOS客户端
aaaran38楼
2019-08-08 12:48   回复  
七叶漂漂(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫IOS客户端
fyy45257839楼
2019-08-08 12:52   回复  
七叶漂漂(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫IOS客户端
wudi072940楼
2019-08-08 12:54   回复  
七叶漂漂(金币+6): 谢谢参与
已获得6个金币 发自小木虫Android客户端
chenchh0642楼
2019-08-08 12:57   回复  
七叶漂漂(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
zxd9543楼
2019-08-08 13:02   回复  
七叶漂漂(金币+5): 谢谢参与
已获得5个金币 发自小木虫Android客户端
天高地厚644楼
2019-08-08 13:04   回复  
七叶漂漂(金币+6): 谢谢参与
已获得6个金币 发自小木虫Android客户端
andy123545楼
2019-08-08 13:04   回复  
七叶漂漂(金币+5): 谢谢参与
已获得5个金币 发自小木虫IOS客户端
相关版块跳转 我要订阅楼主 七叶漂漂 的主题更新
491/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件) SCI英文润色翻译-EnPapers美团队-先修改后付款
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 每到中夜，情难自抑 +36 sioc-sunj 2024-05-28 60/3000 2024-06-03 02:18 by 梨花儿
[硕博家园] 又想换工作 +15 brightmj 2024-05-27 25/1250 2024-06-02 23:57 by brightmj
[基金申请] 2024杰青和万人领军什么时候会评 +5 墨香琴韵 2024-06-02 5/250 2024-06-02 19:31 by xiaqiu
[基金申请] 入职高校3年发表10+SCI，尽人事听天命 +33 kaoyan250 2024-05-27 48/2400 2024-06-02 19:17 by kaoyan250
[教师之家] 选择 +8 459582015 2024-05-31 11/550 2024-06-02 18:30 by auvauv
[硕博家园] 各位同学能否分享一下实验室的学生劳务发放标准呀？ +19 ma3252788 2024-05-30 19/950 2024-06-02 18:15 by Lcy6666
[基金申请] 化学B02口青基 代表作都是什么水平的？向大佬求助 +12 arthas_007 2024-06-01 14/700 2024-06-02 16:18 by 夏木荫浓
[基金申请] 九部门发文：不得将专利授权数量作为人才评价、项目评审、职称评定、高校评价等的条件 +17 sjtu2012 2024-05-28 21/1050 2024-06-02 13:43 by 欢乐颂叶蓁
[考博] 导师不让硕转博，让我去国外读博，能理解吗？ +12 萧山幽谷 2024-05-29 20/1000 2024-06-02 12:01 by yuan0806
[考博] 申请2024或2025年博士研究生 +5 嘟噜嘟1 2024-05-29 12/600 2024-06-01 22:36 by 嘟噜嘟1
[考研] 研0二导师分到新来的博士后靠谱吗 +7 sone9 2024-05-31 7/350 2024-06-01 19:10 by 梦燕园
[基金申请] B口人才项目 +9 WOWO159357 2024-05-29 19/950 2024-06-01 14:24 by linxuhuizj
[基金申请] 数理的人才答辩通知发了吗 +7 yzy3327 2024-05-30 7/350 2024-06-01 09:15 by 撒哈拉西部
[硕博家园] 哈工大硕博招生!博士每月入学! +4 nailooo 2024-05-30 5/250 2024-06-01 06:47 by anevay
[教师之家] 中年 (金币+3) +18 459582015 2024-05-28 19/950 2024-06-01 00:41 by 沈婉婷.Girl
[硕博家园] 求问endnote上Wiley引用格式在哪下载 +3 Elon. 2024-05-30 3/150 2024-05-31 10:13 by crazy peng
[文学芳草园] 物是人非 +4 myrtle 2024-05-30 4/200 2024-05-30 15:05 by mapenggao
[博后之家] 2024公派博后申请 +4 326lhpqk 2024-05-27 5/250 2024-05-29 20:03 by @古月胡
[论文投稿] 核心初审被拒，理由是“选题的意义不明确，文章写得不像是科技论文”，怎么改 5+3 工藤雷花樱 2024-05-27 8/400 2024-05-29 10:09 by topedit
[论文投稿] EI学报，一审返修后，为啥不再送审，直接终审中? +4 qweasd12345 2024-05-27 6/300 2024-05-29 00:02 by dut_ameng
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭