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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 克隆
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啊咩咩咩咩~

新虫 (小有名气)

[求助] 克隆 已有3人参与

请问基因克隆之后做菌落鉴定PCR一直跑不出条带可能是什么原因造成的？

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1楼 2019-07-24 11:17:40
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木元雨

木虫 (职业作家)
克隆失败

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2楼2019-07-24 11:35:20
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965688871

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-07-24 18:00:12
菌落PCR用的引物是什么？如果是通用引物，那有可能是引物坏了或者PCR条件不合适。如果是PCR片段的引物，有可能是克隆失败。
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3楼2019-07-24 12:09:48
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啊咩咩咩咩~

新虫 (小有名气)
克隆扩出了条带，但是菌长得不是很好,菌落PCR也跑不出条带

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4楼2019-07-24 16:23:17
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啊咩咩咩咩~

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 965688871 at 2019-07-24 12:09:48
菌落PCR用的引物是什么？如果是通用引物，那有可能是引物坏了或者PCR条件不合适。如果是PCR片段的引物，有可能是克隆失败。

克隆扩出了条带，但是菌长得不是很好,菌落PCR也跑不出条带

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5楼2019-07-24 16:23:54
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965688871

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 啊咩咩咩咩~ at 2019-07-24 16:23:54
克隆扩出了条带，但是菌长得不是很好,菌落PCR也跑不出条带
...

要么你就提质粒再做PCR吧。
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6楼2019-07-24 16:53:14
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prthefu

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
基因克隆之后，连载体，转化后，涂板，然后挑单克隆做菌液PCR。
像你说的，菌液PCR没有扩出条带，原因可以从以下几个方面来分析：
1.PCR引物：没选好还是有污染？
2.带阳性对照，一般连接的质粒买的时候，好像都带有positive control，可以用它当模板，PCR看看是否有带。
3.操作问题：仔细回想是不是PCR体系配制有问题，或是少加了什么东西？
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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
7楼2019-07-26 11:36:16
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1，没有转入大肠杆菌中  ————重新转化
2，扩增引物是否合适，是否混用用错————换新引物
3，
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8楼2019-08-05 12:57:14
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啊咩咩咩咩~

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 965688871 at 2019-07-24 12:09:48
菌落PCR用的引物是什么？如果是通用引物，那有可能是引物坏了或者PCR条件不合适。如果是PCR片段的引物，有可能是克隆失败。

用的是通用引物

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9楼2019-08-05 14:36:26
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