| 查看: 8980 | 回复: 9 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
同源重组多片段连接做不出来，我想重新做但又不知道是哪里操作的问题，怎么改进? 已有3人参与
|
||
|
使用的是诺维赞多片段连接试剂盒，引物用公司的在线软件设计的。载体8000多bp，三个片段分别1019，381，250多。 1.载体用takara快切酶双酶切30min，切胶回收，目的片段分别以之前的2个T载体扩增，一个质粒扩增，切胶回收。 2.分别稀释跑胶估算载体、三个片段浓度，按片段长度计算大致每个片段需要多少ng，加入多少μl 3.按说明书分别加入4μl载体，三个片段2μl，1μl，1μl，酶和buffer分别2μl，4μl，总体积20μl。37度反应30min。 4.10μl重组产物转化100μl大肠杆菌感受态，过夜培养挑单菌落（比较少） 5.挑了9个单菌落摇菌提了质粒，双酶切都没有切出片段。 6.同时我做了两个阴性对照1和2，都长了很多单菌落。1是只加了载体4μl，加水至20μl.2是只加了三个片段，加水至20μl. @wizardfan @youlinglyw @biostar2009 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有279人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
科研happy
新虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1801.9
- 散金: 1500
- 帖子: 1361
- 在线: 76.8小时
- 虫号: 9708825
- 注册: 2018-08-01
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
10楼2019-08-10 10:26:59
2楼2019-07-24 10:02:34
xinxiyuzhou
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 78 (初中生)
- 金币: 13452.5
- 散金: 55
- 红花: 19
- 帖子: 2045
- 在线: 425小时
- 虫号: 1304974
- 注册: 2011-05-24
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
3楼2019-07-24 12:13:01
匿名
用户注销 (正式写手)
- 应助: 128 (高中生)
- 金币: 4550.4
- 散金: 50
- 红花: 22
- 帖子: 934
- 在线: 645.1小时
- 虫号: 0
- 注册: 2011-10-17
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
4楼2019-07-27 18:40:00
10