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haylig

铜虫 (小有名气)

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专业: 生物工程

[交流] 非常罕见的问题，大家帮我看看。

非常罕见的问题，大家帮我看看。

各位好，有各非常紧急的问题困扰很长时间了。我构建了一个敲除载体，目的片断连到普通T载体上，然后单酶切插入卡那抗性片断，测序结果符合要求。然后以构建好的质粒为模板扩增大片断（目的片断＋卡那抗性），把大片断电击转化我的菌，进行同源重组。但是电击了几次都扩不出来大片断，只能扩出目的片段的大小，以为是假阳性；但是这次我把这些假阳性扩了一下卡那抗性，有些能扩出来，是否说明卡那抗性已经转入，但是为什么扩不出大片断，是转入后二者分开了吗，实在没的解释，希望有经验的帮我分析一下，非常头疼的问题。
还有有做过粪产碱杆菌电转化感受态的吗，能否提供一些经验。我做电转的时候是1800v，电击一次，5ms，但是我看有的文献是2000v，电击两次，作为细菌很少有击两次的，哪位有遇到过相似的问题吗？

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