| 查看: 680 | 回复: 13 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
非常罕见的问题，大家帮我看看。
|
|||
|
非常罕见的问题，大家帮我看看。 各位好，有各非常紧急的问题困扰很长时间了。我构建了一个敲除载体，目的片断连到普通T载体上，然后单酶切插入卡那抗性片断，测序结果符合要求。然后以构建好的质粒为模板扩增大片断（目的片断＋卡那抗性），把大片断电击转化我的菌，进行同源重组。但是电击了几次都扩不出来大片断，只能扩出目的片段的大小，以为是假阳性；但是这次我把这些假阳性扩了一下卡那抗性，有些能扩出来，是否说明卡那抗性已经转入，但是为什么扩不出大片断，是转入后二者分开了吗，实在没的解释，希望有经验的帮我分析一下，非常头疼的问题。 还有有做过粪产碱杆菌电转化感受态的吗，能否提供一些经验。我做电转的时候是1800v，电击一次，5ms，但是我看有的文献是2000v，电击两次，作为细菌很少有击两次的，哪位有遇到过相似的问题吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
材料调剂
已经有4人回复
-
面上模板改不了页边距吧？
已经有6人回复
-
307求调剂
已经有6人回复
-
304求调剂
已经有5人回复
-
317一志愿华南理工电气工程求调剂
已经有8人回复
-
272求调剂
已经有3人回复
-
化工专硕348，一志愿985求调剂
已经有6人回复
-
292求调剂
已经有3人回复
-
290求调剂
已经有6人回复
-
295求调剂
已经有5人回复
695
木虫 (职业作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 4528.5
- 散金: 126
- 红花: 5
- 帖子: 3149
- 在线: 394.1小时
- 虫号: 347369
- 注册: 2007-04-16
- 专业: 植物生理与生化
2楼2009-05-25 19:24:28
3楼2009-05-25 20:18:28
4楼2009-05-25 20:24:01
5楼2009-05-25 20:52:22
6楼2009-05-25 20:58:22
7楼2009-05-25 20:59:04
8楼2009-05-25 21:08:38
savetheday
银虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 208.4
- 散金: 35
- 帖子: 72
- 在线: 85.3小时
- 虫号: 670330
- 注册: 2008-12-08
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
9楼2009-05-25 21:47:23
10楼2009-05-27 18:08:35
