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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落pcr测序不顺利
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三只0小猪仔

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌落pcr测序不顺利 已有1人参与

我做的菌落PCR，以载体通用引物为正向引物，插入的目的基因片段的引物为反向引物，抗性为Amp，凝胶电泳检测菌落pcr产物大小与目的片段相近，之后挑取鉴定为阳性的单菌落在700?l 含Amp的LB培养基中摇菌，浑浊后取500?l送至公司测序，但是公司一直显示菌液未生长，三次了都是这种情况，不知道是不是我实验出了什么问题，请各位大神指导，不胜感激，谢谢。

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1楼 2019-06-25 11:51:47
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木元雨

木虫 (职业作家)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-06-25 22:45:02
要问下你的菌是什么菌种，培养条件和公司的需求是不是一致，还有就是公司的抗性会不会加错了？

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2楼2019-06-25 12:44:05
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这样的话你送几个阳性克隆的质粒吧。我们先前给生工送菌液，总是说无信号，送抽提的质粒就解决了。增加了时间和人力成本，但是结果靠谱。
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3楼2019-06-26 09:41:54
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三只0小猪仔

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2019-06-26 09:41:54
这样的话你送几个阳性克隆的质粒吧。我们先前给生工送菌液，总是说无信号，送抽提的质粒就解决了。增加了时间和人力成本，但是结果靠谱。

但是抽提质粒后跑胶 目的条带大小不一致 所以不明白为什么

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4楼2019-06-30 19:38:28
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 三只0小猪仔 at 2019-06-30 19:38:28
但是抽提质粒后跑胶 目的条带大小不一致 所以不明白为什么
...

那不应该的，你做一下质粒PCR或者酶切再确认一下，然后送测序。
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5楼2019-07-01 08:10:01
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