应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落pcr测序不顺利
51/1返回列表
查看: 1603  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

三只0小猪仔

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌落pcr测序不顺利 已有1人参与

我做的菌落PCR，以载体通用引物为正向引物，插入的目的基因片段的引物为反向引物，抗性为Amp，凝胶电泳检测菌落pcr产物大小与目的片段相近，之后挑取鉴定为阳性的单菌落在700?l 含Amp的LB培养基中摇菌，浑浊后取500?l送至公司测序，但是公司一直显示菌液未生长，三次了都是这种情况，不知道是不是我实验出了什么问题，请各位大神指导，不胜感激，谢谢。

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-06-25 11:51:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木元雨

木虫 (职业作家)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-06-25 22:45:02
要问下你的菌是什么菌种，培养条件和公司的需求是不是一致，还有就是公司的抗性会不会加错了？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2019-06-25 12:44:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这样的话你送几个阳性克隆的质粒吧。我们先前给生工送菌液，总是说无信号，送抽提的质粒就解决了。增加了时间和人力成本，但是结果靠谱。
赞一下 回复此楼
3楼2019-06-26 09:41:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三只0小猪仔

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2019-06-26 09:41:54
这样的话你送几个阳性克隆的质粒吧。我们先前给生工送菌液，总是说无信号，送抽提的质粒就解决了。增加了时间和人力成本，但是结果靠谱。

但是抽提质粒后跑胶 目的条带大小不一致 所以不明白为什么

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2019-06-30 19:38:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 三只0小猪仔 at 2019-06-30 19:38:28
但是抽提质粒后跑胶 目的条带大小不一致 所以不明白为什么
...

那不应该的，你做一下质粒PCR或者酶切再确认一下，然后送测序。
赞一下 回复此楼
5楼2019-07-01 08:10:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 三只0小猪仔 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售渎SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。备注【⊙=0】 +3 ipys00zm58 2026-03-06 5/250 2026-03-07 03:46 by vwchyxxzm4
[考研] 求调剂 一志愿苏州大学，0856化工323分 | 本科应化 | 有专利/竞赛/科研助手经历 | +5 橙子cyx 2026-03-06 6/300 2026-03-06 23:13 by L135790
[考研] 0817化学工程与技术312分求调剂 +4 T123 tt 2026-03-04 4/200 2026-03-06 22:12 by 星空星月
[考研] 复试调剂 +7 呼呼？~+123456 2026-03-05 10/500 2026-03-06 16:07 by @飒飒飒飒
[考研] 一志愿华中科技大学，化学专业344分，求调剂 +7 邢xing1 2026-03-02 7/350 2026-03-06 09:14 by guoweigw
[考研] 304求调剂 +4 曼殊2266 2026-03-05 4/200 2026-03-05 17:10 by zhukairuo
[考博] 申博 +3 添菜了哈 2026-03-04 5/250 2026-03-05 13:13 by 添菜了哈
[考研] 材料复试调剂 +7 学材料的点 2026-03-01 8/400 2026-03-04 21:08 by wutongshun
[考研] 307求调剂 +4 xuyuan111 2026-03-04 5/250 2026-03-04 20:39 by kakakapanpan
[考研] 成绩276，专业代码0856求调剂 +10 小陈朵 2026-03-03 10/500 2026-03-04 20:16 by 1124861332
[考研] 281求调剂 +3 Y?l?h 2026-03-04 3/150 2026-03-04 10:51 by 汪！？！
[考研] 材料325求调剂 30+5 mariusuki 2026-03-02 10/500 2026-03-04 09:24 by njzyff
[考研] 0856材料工程，初试313调剂 +7 卖个关子吧 2026-03-03 7/350 2026-03-03 21:33 by L135790
[考研] 0857调剂 +6 一ll半 2026-02-28 8/400 2026-03-03 09:30 by 热情沙漠
[考研] 271求调剂 +4 Ricardo1113 2026-03-02 4/200 2026-03-03 08:00 by 无际的草原
[考研] 295求调剂。一志愿报考郑州大学化学工艺学硕，总分295分 +8 yl1 2026-03-02 9/450 2026-03-02 21:21 by sunny81
[考研] 306分材料调剂 +5 chuanzhu川烛 2026-03-01 6/300 2026-03-02 19:51 by 张晓芳0105
[考研] 303求调剂 +5 今夏不夏 2026-03-01 5/250 2026-03-02 15:01 by 向上的胖东
[考研] 275求调剂 +3 L-xin? 2026-03-01 6/300 2026-03-02 10:22 by 热情沙漠
[考研] 材料类求调剂 +11 wana_kiko 2026-02-28 14/700 2026-03-02 08:46 by 聪明的大松鼠
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭