应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落pcr测序不顺利
51/1返回列表
查看: 1820  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

三只0小猪仔

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌落pcr测序不顺利 已有1人参与

我做的菌落PCR，以载体通用引物为正向引物，插入的目的基因片段的引物为反向引物，抗性为Amp，凝胶电泳检测菌落pcr产物大小与目的片段相近，之后挑取鉴定为阳性的单菌落在700?l 含Amp的LB培养基中摇菌，浑浊后取500?l送至公司测序，但是公司一直显示菌液未生长，三次了都是这种情况，不知道是不是我实验出了什么问题，请各位大神指导，不胜感激，谢谢。

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-06-25 11:51:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木元雨

木虫 (职业作家)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-06-25 22:45:02
要问下你的菌是什么菌种，培养条件和公司的需求是不是一致，还有就是公司的抗性会不会加错了？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2019-06-25 12:44:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这样的话你送几个阳性克隆的质粒吧。我们先前给生工送菌液，总是说无信号，送抽提的质粒就解决了。增加了时间和人力成本，但是结果靠谱。
赞一下 回复此楼
3楼2019-06-26 09:41:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三只0小猪仔

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2019-06-26 09:41:54
这样的话你送几个阳性克隆的质粒吧。我们先前给生工送菌液，总是说无信号，送抽提的质粒就解决了。增加了时间和人力成本，但是结果靠谱。

但是抽提质粒后跑胶 目的条带大小不一致 所以不明白为什么

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2019-06-30 19:38:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 三只0小猪仔 at 2019-06-30 19:38:28
但是抽提质粒后跑胶 目的条带大小不一致 所以不明白为什么
...

那不应该的，你做一下质粒PCR或者酶切再确认一下，然后送测序。
赞一下 回复此楼
5楼2019-07-01 08:10:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 三只0小猪仔 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +4 Tide man 2026-08-04 7/350 2026-08-04 11:23 by Tide man
[基金申请] 娱乐 +3 Tide man 2026-08-03 3/150 2026-08-04 09:58 by gltch
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 17/850 2026-08-04 09:46 by archvillain
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 f1dmPx051StA 2026-08-03 7/350 2026-08-04 09:31 by v1TJC4qJauAB
[博后之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 5/250 2026-08-04 09:27 by v1TJC4qJauAB
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 10/500 2026-08-04 09:26 by v1TJC4qJauAB
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 09:17 by v1TJC4qJauAB
[基金申请] 系统今天又提示维护了，估计离放榜不远了 +12 winnerche 2026-07-29 16/800 2026-08-04 08:18 by Equinoxhua
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 10/500 2026-08-04 08:05 by 88817753
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 07:37 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 13/650 2026-08-04 07:30 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 6/300 2026-08-04 04:47 by k7OM8YghWbkC
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 03:21 by k7OM8YghWbkC
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +19 低垂的野花 2026-07-31 25/1250 2026-08-03 09:25 by gy116024
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +16 布布和一二 2026-07-30 22/1100 2026-08-03 09:20 by gy116024
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +15 wangze12014 2026-07-28 19/950 2026-08-02 20:05 by 蔡棒棒菂
[考博] 2027年申博 50+3 射雕英雄胜 2026-07-30 3/150 2026-08-02 09:36 by lfy8008
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭