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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助，300bp目的片段T4连接问题
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jhcln

金虫 (小有名气)

[交流] 求助，300bp目的片段T4连接问题

我的目的片段300bp左右，是在聚丙烯酰胺上切胶回收的，跑电泳条带不清晰，以此片段进行pcr有二聚体，请问这样的目的片段可以用来进行T4连接吗？T4连接对目的片段有何要求？望各位前辈指教！！
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1楼 2009-05-24 23:19:45
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humants

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by anlewo7777 at 2009-5-25 08:44:
不知道你是担心连接后不长白斑还是担心连不上，或是片段太少，你先连一下试试，我连过375bp的，正常，实验总要试过才知道。

很有道理，其实有的时候，问得时候实验也出来了，
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4楼2009-05-26 17:39:05
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anlewo7777

木虫 (正式写手)
不知道你是担心连接后不长白斑还是担心连不上，或是片段太少，你先连一下试试，我连过375bp的，正常，实验总要试过才知道。
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2楼2009-05-25 08:44:20
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月月大可

木虫 (著名写手)
楼主要是做T-A连接那不有试剂盒，干嘛还用T4连。
另外如果用T-Al连，出入片段小确实可能不长白斑，不过你到时候可是挑几个蓝斑试试。
如果你是PCR产物，酶切后直接连载体倒也没什么特殊要求，但是要保证有一定的量，量太少了不好连。另外也看你用的内切酶，有的内切酶切下来的好连，有的内切酶切下来的不好连。我用过Nde1，虽然是粘端，但是连接效率很低，都是按照平端体系连接的。
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3楼2009-05-25 08:56:32
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jqq1985

银虫 (正式写手)
你为什么不多做点片段呢？
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5楼2009-05-26 19:18:58
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