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jhcln

金虫 (小有名气)

[交流] 求助,300bp目的片段T4连接问题

我的目的片段300bp左右,是在聚丙烯酰胺上切胶回收的,跑电泳条带不清晰,以此片段进行pcr有二聚体,请问这样的目的片段可以用来进行T4连接吗?T4连接对目的片段有何要求?望各位前辈指教!!
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月月大可

木虫 (著名写手)

楼主要是做T-A连接那不有试剂盒,干嘛还用T4连。
另外如果用T-Al连,出入片段小确实可能不长白斑,不过你到时候可是挑几个蓝斑试试。
如果你是PCR产物,酶切后直接连载体倒也没什么特殊要求,但是要保证有一定的量,量太少了不好连。另外也看你用的内切酶,有的内切酶切下来的好连,有的内切酶切下来的不好连。我用过Nde1,虽然是粘端,但是连接效率很低,都是按照平端体系连接的。
3楼2009-05-25 08:56:32
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anlewo7777

木虫 (正式写手)

不知道你是担心连接后不长白斑还是担心连不上,或是片段太少,你先连一下试试,我连过375bp的,正常,实验总要试过才知道。
2楼2009-05-25 08:44:20
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humants

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by anlewo7777 at 2009-5-25 08:44:
不知道你是担心连接后不长白斑还是担心连不上,或是片段太少,你先连一下试试,我连过375bp的,正常,实验总要试过才知道。

很有道理,其实有的时候,问得时候实验也出来了,
4楼2009-05-26 17:39:05
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jqq1985

银虫 (正式写手)

你为什么不多做点片段呢?
5楼2009-05-26 19:18:58
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