24小时热门版块排行榜    

查看: 406  |  回复: 4
当前主题已经存档。

jhcln

金虫 (小有名气)

[交流] 求助,300bp目的片段T4连接问题

我的目的片段300bp左右,是在聚丙烯酰胺上切胶回收的,跑电泳条带不清晰,以此片段进行pcr有二聚体,请问这样的目的片段可以用来进行T4连接吗?T4连接对目的片段有何要求?望各位前辈指教!!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anlewo7777

木虫 (正式写手)

不知道你是担心连接后不长白斑还是担心连不上,或是片段太少,你先连一下试试,我连过375bp的,正常,实验总要试过才知道。
2楼2009-05-25 08:44:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)

楼主要是做T-A连接那不有试剂盒,干嘛还用T4连。
另外如果用T-Al连,出入片段小确实可能不长白斑,不过你到时候可是挑几个蓝斑试试。
如果你是PCR产物,酶切后直接连载体倒也没什么特殊要求,但是要保证有一定的量,量太少了不好连。另外也看你用的内切酶,有的内切酶切下来的好连,有的内切酶切下来的不好连。我用过Nde1,虽然是粘端,但是连接效率很低,都是按照平端体系连接的。
3楼2009-05-25 08:56:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

humants

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by anlewo7777 at 2009-5-25 08:44:
不知道你是担心连接后不长白斑还是担心连不上,或是片段太少,你先连一下试试,我连过375bp的,正常,实验总要试过才知道。

很有道理,其实有的时候,问得时候实验也出来了,
4楼2009-05-26 17:39:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqq1985

银虫 (正式写手)

你为什么不多做点片段呢?
5楼2009-05-26 19:18:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jhcln 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 316求调剂 +8 梁茜雯 2026-03-19 8/400 2026-03-25 20:33 by 热情沙漠
[考研] 26考研-291分-厦门大学(085601)-柔性电子学院材料工程专业求调剂 +3 min3 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:22 by xcjcqu
[考研] 总分293求调剂 +4 加一一九 2026-03-25 4/200 2026-03-25 12:56 by Dyhoer
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 271求调剂 +4 生如夏花… 2026-03-22 4/200 2026-03-25 11:25 by userper
[考研] 287求调剂 +10 晨昏线与星海 2026-03-19 11/550 2026-03-25 10:35 by userper
[考研] 277分求调剂,跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考研] 305分求调剂(食品工程) +5 Sxy112 2026-03-21 7/350 2026-03-24 12:27 by 544594351
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪!?!
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap- 2026-03-22 9/450 2026-03-23 12:57 by yqdszhdap-
[考研] 材料与化工085600,总分304,本科有两篇sci参与,求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
信息提示
请填处理意见