24小时热门版块排行榜    

查看: 484  |  回复: 4
当前主题已经存档。

jhcln

金虫 (小有名气)

[交流] 求助,300bp目的片段T4连接问题

我的目的片段300bp左右,是在聚丙烯酰胺上切胶回收的,跑电泳条带不清晰,以此片段进行pcr有二聚体,请问这样的目的片段可以用来进行T4连接吗?T4连接对目的片段有何要求?望各位前辈指教!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anlewo7777

木虫 (正式写手)

不知道你是担心连接后不长白斑还是担心连不上,或是片段太少,你先连一下试试,我连过375bp的,正常,实验总要试过才知道。
2楼2009-05-25 08:44:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)

楼主要是做T-A连接那不有试剂盒,干嘛还用T4连。
另外如果用T-Al连,出入片段小确实可能不长白斑,不过你到时候可是挑几个蓝斑试试。
如果你是PCR产物,酶切后直接连载体倒也没什么特殊要求,但是要保证有一定的量,量太少了不好连。另外也看你用的内切酶,有的内切酶切下来的好连,有的内切酶切下来的不好连。我用过Nde1,虽然是粘端,但是连接效率很低,都是按照平端体系连接的。
3楼2009-05-25 08:56:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

humants

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by anlewo7777 at 2009-5-25 08:44:
不知道你是担心连接后不长白斑还是担心连不上,或是片段太少,你先连一下试试,我连过375bp的,正常,实验总要试过才知道。

很有道理,其实有的时候,问得时候实验也出来了,
4楼2009-05-26 17:39:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqq1985

银虫 (正式写手)

你为什么不多做点片段呢?
5楼2009-05-26 19:18:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jhcln 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +5 zju2000 2026-08-16 5/250 2026-08-16 23:23 by Haru815
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
请填处理意见