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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 小白求助~~水稻克隆基因全长
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钢盔1993

新虫 (初入文坛)

[交流] 小白求助~~水稻克隆基因全长

求助大神们~~~

水稻材料：一个育种材料
目标基因：Os*********
目的：克隆该基因全长

想询问，反转录后，进行PCR扩增时，这个引物该如何设计？
前期是根据参考基因组该基因的cDNA序列进行设计的，产物是1400bp左右。
但是跑出来只有200bp左右。

请问这种情况，可以直接根据参考基因组cDNA序列进行设计吗、？
还是必须使用其它的克隆方法？？

求求大神们了，已被困扰两月有余
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1楼2019-06-12 10:25:30
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 钢盔1993 at 2019-06-20 15:27:09
好的！谢谢大神！我再追问一下，总而言之，如果引物设计没问题的话，这个克隆方法是没问题的吧！会不会存在我的品种基因型与参考基因组差别比较大所以克不出来呢...

方法没有问题，不是引物的问题就是表达量低扩增不到的问题，如果你的品种没有参考基因组，就多找几个水稻品种的这个基因序列比对一下，看序列差别大不大。如果不大，说明不是品种基因型的问题。
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23楼2019-06-21 02:28:14
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钢盔1993

新虫 (初入文坛)
大家不要光回复，请指导下可怜的我吧！

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6楼2019-06-13 12:40:30
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jiaoxg9楼
2019-06-13 15:41   回复  
钢盔1993(金币+2): 谢谢参与
xhmaohan7楼
2019-06-13 12:55   回复  
钢盔1993(金币+2): 谢谢参与
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hbabc12楼
2019-06-14 06:47   回复  
钢盔1993(金币+2): 谢谢参与
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M塞北11楼
2019-06-14 06:36   回复  
钢盔1993(金币+2): 谢谢参与
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南国小城13楼
2019-06-14 07:58   回复  
钢盔1993(金币+2): 谢谢参与
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